ヒト骨格筋および中枢神経におけるカルシウムポンプ蛋白の分布と病態

1986 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 61570395
• Research Institution: Okinaka Memorial Institute for Medical Research
• Principal Investigator: 高木 昭夫 冲中成人病研, その他, 研究員 (20010142)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 荒木 誠 国立神経研究所, 研究員 ; 小島 進 冲中記念成人病研究所, 研究員
• Keywords: 筋小胞体 / Caポンプ蛋白 / 抗Caポンプ蛋白抗体 / Ca輸送 / 筋拘縮 / 細胞内pH / スキンドファイバー / 筋ジストロフィー

Research Abstract

1.Caポンプ蛋白に対する抗体(ポリクローナル)の作製
ラット骨格筋(主として白筋)より超遠心法にて筋小胞体(SR)分画を調製した。Meissnerらの方法にしたがい、SRを0.05%(W/V)deoxy-cholateで2度抽出し、Caポンプ蛋白を精製した。この分画はSDS-PAGEにより、分子量100Kの単一バンドを呈した。この蛋白を抗原として、家兎を免疫し抗血清を作製した。Outcherlony二重拡散法によると、SR分画との間に一本の明瞭な沈降線とその外周にかすかな線の形成をみた。免疫ブロット法によると、MW、100KのCaポンプ蛋白との間に反応をみた。その他に70Kと30Kにあわい反応がみとめられた。筋原線維蛋白との間には交叉する抗体はみとめられなかった。70Kと30Kは分解産物の可能性が考えられた。このように抗血清は特異性に問題が残ったため 主として生理的実験に応用するにとどめた。
2.筋小胞体のCa摂取とCa遊離
スキンドファイバーを10倍命釈抗血清と12時間incubationした。この必理によりCa摂取能は影響されなかった。またカフェインによる筋拘縮も影響されなかった。抗体のCa輸送に対する影響は分離SRを使用して検討されてきたが、まだ結論には至っていない(MartonosiとFortier1974,SumidaとSasaki 1975)。主題とは別に細胞内pHの張力発生と興奮収縮連関への影響を分析した。正常静止筋の細胞内pHは7.0附近といわれる。代謝ミオパチーや筋ジストロフィーでは7.2以上に上昇するといわれる。この際筋収縮系のCa感受性は増加し、収縮力の増強がみられた。またCa誘発性Ca遊離は著増した。この現象はこれらの疾病における筋拘縮と筋破壊の原因となると推定した。

Research Products

• [Publications] 高木昭夫: Muscle and Nerue. 9(5S). 212 (1986)
• [Publications] Araki A: Biomedical Research. 7. 187-190 (1986)
• [Publications] 高木昭夫: Animal Reuiew 神経 1987. 259-272 (1987)
• [Publications] 高木昭夫: 筋ジストロフィー症の臨床、病態と成因に関する研究 昭和61年度研究報告書.
• [Publications] 高木昭夫: 神経精神薬理. 9. 147-154 (1987)
• [Publications] 小島進: 治療. 68. 95-100 (1986)
• [Publications] 高木昭夫: "新小児医学大系第ISA 小児運動器病学【I】" 中山書店, (1986)
• [Publications] 高木昭夫: "新生理学大系(4)" 医学書院, (1986)