1987 Fiscal Year Annual Research Report
ヒト尿由来トロンボポエチンの精製と人体への応用の可能性の検討
Project/Area Number |
61570584
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Research Institution | Kumamoto University |
Principal Investigator |
河北 誠 熊本大学, 医学部, 助教授 (20040280)
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Keywords | トロンボポエチン / 抗エリスロポエチン抗体カラム / 再生不良性貧血患者尿 |
Research Abstract |
本年度は前年度までに開発したマウス骨髄細胞の液体培養によるアセチルコリンエステラーゼ(AchE)総括性を指標としたトロンボポエチン(Tpo)活性測定法を用いて再生不良性貧血(再不貧)患者尿抽出物よりのTpo精製を行った. しかし再不貧尿抽出物にはエリスロポエチン(Epo)が多量に混在している. Epoは従来赤血球系造血に特異的と考えられていたが, 近年巨核球血小板系造血にも作用することが明らかになり, 我々も遺伝子組み替えにより産生されたEpoの純化評品を用いてこのことを確認し報告した. 従って本法を用いる場合にもこの点が問題となるため, 純化Epoを加えてAchE活性の上昇を検討したところ, Epoに対し, 用量反応的にAchE総括性の上昇を認めた. そこで再不貧尿抽出物からのTpo精製には, Epoを除去する必要がある. そのため, 今回抗Epo抗体カラムによるEpoの除去を試みた. まず家〓をEpoで免疫し, 得られた抗血清からプロテインAセファローズでIgGを分離し, 型のごとくアフィジェル10へ固定化し抗体カラムを作製した. 前年度既に報告した方法に従い, 粗標品をエタノール沈澱により分画し, 70〜90%沈澱の画分を高速液体クロマトグラフィー(Synchropak RP-4)で分画した. 活性はアセトニトリル63〜70%で溶出される. この画分にはEpoも含まれるのでこれを用いてEpoの除去実験を行った. 抗Epoカラムにかけ, 非吸着画分を回収濃縮後, 吸着蛋白を溶出させた抗体カラムに再度かけて非吸着画分を回収濃縮した. この過程でEpoの90%が除かれることが確認された. 現在精製過程の早期に抗体カラムの使用を組み込むべく, 抗体カラムの大型化を計画中である.
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Research Products
(4 results)
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[Publications] Kawakita M. et al.: Acta Haemato logia Japanica. 50. 1586-1596 (1987)
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[Publications] Sakaguchi M. et al.: Experimental Hewatology. 15. 1028-1034 (1987)
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[Publications] Sakaguchi M. et al.: Biochevical and Biophysical Research Communication.
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[Publications] Hiroyuki Tsuda et al.: Journal of cell cloning.