単クローン抗体を用いたC.jejuni感染症の迅速診断法の開発

1987 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 61571118
• Research Institution: Showa University
• Principal Investigator: 中村 良子 昭和大学, 医学部, 助教授 (70119238)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 青木 良雄 昭和大学, 医学部, 教授 (50053749)
• Keywords: カンピロバクター(Campylobacter jejuni) / モノクローナル抗体 / 迅速診断 / 抗原検出 / 抗体検出

Research Abstract

我々は, 急性胃腸炎の原因菌として最も分離頻度の高いカンピロバクターによる感染症の迅速診断法を開発する目的で研究を続けている. C.jejuni由来の抗原を用いて以下のモノクローキル抗体(MoAb)を作製した. (1)加熱上清抗原に対するMoAb産生ハイプリドーマ6株(65KDに対するMoAb産生株4株, 45KDに対するMoAb産生株2株). (2)ハイドロキシアパタイトカラムクロマトグラフィーにより分画した主として65KDポリペプチドを抗原として得られたハプリドーマ25株(65KDに対するMoAb産生株1株, 45KDに対するMoAb産生株4株). (3)ソニケート抗原に対するMoAb産生ハイプリドーマ2株(45KDに対するMoAb産生株2株). (4)生菌に対するMoAb産生ハイプリドーマ3株(いずれも45KDに対するMoAb酸性株)計, 6株のMoAb産生ハイプリドーマの産生する抗体について特異性を検討した. 下痢を起こしうる16種の他菌種を用いて, 各々の交叉性を調べた. 多くの抗体は数種の他菌種と交叉したが, T-194抗体は, 菌体凝集およびmicro-ELISAで全く他菌種との交叉が認められず, カンピロバクター特異的であった. T-194株は, 65KD抽出抗原を用いて得られたハイプリドーマで, 産生抗体の種類はIgM, エピトープは65KDポリペプチドである. 現在, このT-194MoAbを腫水化中であり, ラテックス凝集反応や蛍光抗体法により, 検体中の菌(抗原)を直接短時間のうちに検出する方法を検討する予定である. また65KD抽出抗原を用いても45KDをエピトープとするMoAb産生株が得られたことから, 特異抗体を得るためには, 逆に得られたMoAbを用いてアフィニティカラムクロマトグラフィーを行い, 抗原を精製する必要があり, このことはC.jejuniの抗原解析の上からも興味深い. 現在, アフィニティーカラムクロマトグラフィーの条件を検討中である. 一方, Western blot法による抗体検出について検討した結果, 病態解析に有用であると考えられた.

Research Products

• [Publications] 中村 良子 他: 日本細菌学雑誌. 39. 593 (1984)
• [Publications] 吉田 勝彦 他: 臨床病理. 33. 336 (1985)
• [Publications] 中村 良子 他: 臨床病理. 34. 454-458 (1986)
• [Publications] 吉田 勝彦 他: 衛生検査. 36. 649 (1987)