1988 Fiscal Year Annual Research Report
Project/Area Number |
61580221
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Research Institution | Nagoya University |
Principal Investigator |
武田 穰 名古屋大学, 農学部, 助手 (70155026)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岩村 達一 市邨学園短期大学, 一般教育, 教授 (00013300)
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Keywords | クロレラ / クローン化 / 塩基配列 / myc / 細胞周期 |
Research Abstract |
I.クロレラ細胞周期におけるポリA+mRNAの変動 前年度までにクローン化したクロレラv-myc様DNA断片(CMD)が果たして細胞内で遺伝子として機能しているか否かは、Ch-mycとしての最も重要な問題点である。我々はこのため、まずクロレラ細胞のポリA+mRNAの精製及びその蛋白翻訳活性、更にこれらの細胞周期における変動について検討した。その結果、(1)オリゴdTセルロースに吸着されるポリA+mRNAは、小麦胚芽無細胞蛋白合成系で効率よく翻訳される。 (2)このポリA+mRNA量は葉緑体DNA、核DNA合成期に急激に増大する。又、その蛋白翻訳活性はG1期から核DNA合成直前期(葉緑体DNA合成期)にかけて最も高い。 (3)翻訳産物を二次元電気泳動で分析すると、G1期と葉緑体DNA合成期とでは質的に異なり、後者では塩基性かつ分子量の大きい蛋白が著るしく増加した。 II.Ch-mycの細胞周期における転写変動 この基礎に立ってCh-mycの転写について検討した。ポリA+mRNAに対し、CMDBの二つのサブクローン(4.8Kb断片をサブクローンするにあたり、2つに分けてはじめて成功した。)のうちS2の方がS1よりかなり強くハイブリダイズした。S1+S2及びCMDB全断片(入組換ファージより単離)をプローブとしてCMDB転写産物を検出したところ、これが核DNA合成直前期に最も多量に存在し、I.の結果からみても、これがこの時期に蛋白に翻訳されている可能性は高い。 種々の動物のC-myc DNAとの塩基配列の比較検討により、CMDB中にC-mycとしての遺伝子構造モデルが推定された。
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