ヒトの遺伝子マップと染色体のDNAセグメントマップの作成

1987 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 62440083
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 清水 信義 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (50162706)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 工藤 純 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (80178003)
• Keywords: 染色体ソーティング / セルソーター / 雑種細胞 / 遺伝子マッピング / ミエロパーオキシダーゼ / インターロイキン4 / インスリンレセプター / ホスホリボシルピロリン酸シンテターゼ

Research Abstract

ポリアミン・ジギトニン法でヒト培養リンパ球(GM130B)から得た分裂中期染色体をヘキスト33258で染色し, FACS440セルソーターを用いて15分画に分別できるようになった. すなわち, シングルレーザーを用いた場合の分離能のほぼ限界まで達成できた. また, ヒト×マウス雑種細胞からのヒト染色体の分離も成功している. さらに, セルソーターから分別されてくる各染色体画分をニトロセルロースフィルター上に直接回収し, アイソトープ標識したプローブとのハイブリダイゼーションを行なって, マッピングを迅速に行なう方法を確立した.
このような染色体スポットブロット・ハイブリダイゼーション法を用いて, ミエロパーオキシダーゼ(MPO)を第17染色体に, インターロイキン 4(IL4)を第5染色体に, インスリンレセプターと相同配列を持つ0.4kbDNAセグメント(INSRL)を7p13ーq22領域にマップした. さらに, ホスホリボシルピロリン酸シンテターゼ(PRPS)を構成する2個のサブユニットに対応する遺伝子, PRPS1とPRPS2, をそれぞれXq21ーqterおよびXpterーq21にマップしただけでなく, PRPS1に相同な配列をもつ遺伝子PRPSL1, PRPSL2を見出し, それぞれXp22ーqterおよび第9染色体にマップした.

Research Products

• [Publications] J. Kudoh, S. Minoshima, K. Hashinaka, C. Nishio, M. Yamada, Y. Shimizu and N. Shimizu: Ninth International Workshop of Human Gene Mapping 9 Abstracts. 497 (1987)
• [Publications] J. Kudoh, S. Minoshima, A. Ullrich, Y. Shimizu and N. Shimizu: Ninth International Workshop of Human Gene Mapping 9 Abstracts. 498 (1987)
• [Publications] M. Taira, J. Kudoh, S. Minoshima, M. Tatibana, Y. Shimizu and N. Shimizu: Ninth International Workshop of Human Gene Mapping 9 Abstracts. SUPPL.5 (1987)
• [Publications] N. Shimizu, S. Minoshima, J. Kudoh, K. Kawasaki, R. Fukuyama and M. Maekawa: Cold Spring Harbor Symposium Abstracts.
• [Publications] M. Taira, T. Iizasa, S. Ishijima, K. Yamada, M. Tatibana, J. Kudoh, S. Minoshima and N. Shimizu: 14th International Congress of Biochemistry Abstracts.
• [Publications] S. Minoshima, J. Kudoh, R. Fukuyama, M. Maekawa, Y. Takebe, T. Yokota,N. Arai, K. Arai and N. Shimizu: XVIth International Congress of Genetics Abstracts.