1988 Fiscal Year Annual Research Report
フォンビルブラント因子の構造解析を中心とした血小板凝集に関する研究
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62440087
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| Research Institution | Fujita Health University |
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Principal Investigator |
千谷 晃一 藤田学園保健衛生大学, 医学部, 教授 (60179942)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤村 吉博 奈良県立医科大学, 輸血部, 助教授 (80118033)
松井 太衛 藤田学園保健衛生大学, 医学部, 助手 (90183946)
小山 文隆 藤田学園保健衛生大学, 医学部, 助手 (40194641)
関口 清俊 藤田学園保健衛生大学, 医学部, 講師 (50187845)
水落 次男 藤田学園保健衛生大学, 医学部, 助教授 (90133149)
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| Keywords | フォルビルブラント因子 / 血小板凝集 / 血小板膜糖タンパク質(GP)Ib / リストセチン / ボトロセチン / アミノ酸配列 / ジスルヒド結合 / アスパラギン結合糖鎖 / モノクロナール抗体 / エピトープ |
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| Research Abstract |
1) ボトロセチンの精製と性質:リストセチン同様フォンビルブラント因子(vWF)による血小板凝集を惹起するタンパク質性因子として知られる蛇(Brthrops jararaca)毒中のボトロセチンを数種の液体クロマトグラフィーを用いてほぼ純粋な状態にまで精製した。精製標品は単一のアミノ末端アミノ酸配列を示し、SDSーPAGEで非還元で28kDa、還元で31kDaとほぼ同一の分子量を示すことからモノメリックな1本のポリペプチド鎖から構成されていることがわかった。又等電点pH4以下の異常に酸性の強いタンパク質で、ジスルヒド結合を多く含み、それを切断しない状態ではトリプシン、キモトリプシン、V8プロテアーゼなどに対し著るしい抵抗性を示す。現在その作用機作について検討中である。
2) 抗vWFモノクロナール抗体NMCー4のエピトープ解析:vWFと血小板膜GPIbとの結合様式を解析するため、リストセチン血小板凝集を抑制するNMCー4の固相化カラムを作成し、vWFのトリプシン消化物を抗体精製したところ97kDaフラグメントが得られた。これは既にvWFのGPIb結合ドメインとして知られたペプチド領域Val^<449>ーLys^<728>のホモダイマーであることがわかった。ウェスタンブロット法でNMCー4は非還元のもの同様還元で得られる52/48kDaのものも認識したが、還元後カルボキシメチル化したものは認識しなかった。現在同じペプチド領域を認識する他のモノクロナール抗体とのエピトープの相異について検討中である。
3) アスパラギン結合糖鎖:昨年に引続きサブユニット当り12ケのAsnに結合している糖鎖の構造を決定しているが、高マンノース型糖鎖、複合型糖鎖、混成型糖鎖などの存在がわかった他、さらに少くとも7種類の糖鎖構造が存在することが明らかとなり、現在これらのものの解析を続行中である。
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[Publications] K.Titani;et al.: Trends in Biochemical Sciences. 13. 94-97 (1988)
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[Publications] S.D.Berkowitz;et al.: Blood. 72. 721-727 (1988)
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[Publications] 千谷晃一 他: 実験医学. 6. 1249-1252 (1988)
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[Publications] V.Fujimura;et al.: Blood. (1989)
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[Publications] K.Titani et al.: "Coagulation and Bleeding Disorders,the Role of Factor VIII and von Willebrand Factor(T.S.Zimmerman and Z.M.Ruggeri eds.);6.Primary Structure of von Willebrand Factor" Marceel Dekker,New York, 1-370 (1988)
