1989 Fiscal Year Annual Research Report
宿主特異性決定過程における宿主ー病原体の遺伝子発現に関する研究
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62480045
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| Research Institution | OKAYAMA UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
奥 八郎 岡山大学, 農学部, 教授 (20033144)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山田 哲治 岡山大学, 農学部, 助教授 (00191320)
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| Keywords | エリシタ- / サプレッサ- / フェニ-ルアラニン・アンモニア・リア-ゼ(PAL) / ピサチン / PALアイソザイム / エンドウ |
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| Research Abstract |
1 エンドウPAL-cDNAのクロ-ニングとDNA塩基配列決定
エリシタ-で処理したエンドウ胚軸からポリ(A^+)RNAを調製し、λgt10を用いてcDNAライブラリ-を作成した。インゲンPAL-cDNA(Dr.C.J.Lamb,the Salk Institute,University of California、より譲渡)をプロ-ブとしてcDNAライブラリ-(2×10^5プラ-ク)からPAL-cDNAのスクリ-ニングを行ったところ、6個の陽性プラ-クを得た。全長に近いと考えられる2.5kbのcDNAの部分的DNA塩基配列を決定したところ、3'ー側にはインゲン、パセリのPAL-cDNAと非常に高い塩基配列相同性(>80%)が見られたが、5'ー側は比較的分散していた。6個のcDNAの制限酵素マッピングによる解析によると2種類以上に分類できるが、それぞれ、非常に共通した制限酵素部位を有していた。
2 エンドウPAL-ゲノミックDNAのクロ-ニング
エンドウゲノミックDNAライブラリ-をEMBL3を用いて作成し、上記エンドウPAL-cDNAをプロ-ブとして5×10^6個のプラ-クをスクリ-ニングしたところ、5個の陽性プラ-クが得られた。現在、これらのクロ-ンをサザンブロット・ハイブリダイゼ-ションと各種制限酵素マッピングにより解析している。更に解析を進め、PAL遺伝子の数と、エリシタ-で誘導をうけるPAL遺伝子を同定する計画である。
3 PALアイソザイムの精製と性格づけ
塩化銅でPAL活性を誘導したエンドウ葉から、PAL酵素をDEAEセルロ-ス、イオン交換クロマトグラフィ-、ゲル濾過クロマトグラフィ-、アフィニチィ-クロマトグラフィ-で純化したところ、少なくとも3つのアイソザイムが存在することが明らかとなった。SDSポリアクリルアミド電気泳動で分画したところ、メジャ-なアイソザイムの分子量は約7万ダルトンであった。今後更に性格付けを行い、PAL遺伝子のDNA塩基配列決定により導かれるアミノ酸配列との対応を求めて行く予定である。
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[Publications] Tetsuji Yamada: "Suppression of Pisatin,Phemylalanine Ammonia-Lyase mRNA and Chalcone Synthase mRNA Accumulation by a Putative Pathogenicity Factor from the fungus Mycosphaerella pinodes" Mol.Plant-Micr:Intr.2. 256-261 (1989)
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[Publications] 橋本尚子: "エンドウ品種アラスカの葉外植片からのカルス誘導と植物体再生" 植物組織培養. 6. 165-168 (1989)
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[Publications] T.Yamada: "Elicitor-like Substances Present in Barley and Wheat Seeds" J.Phytopath.(1990)
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[Publications] T.Shiraishi: "A Fungal Pathogenicity Factor Suppresses ATPase Activity in Host Plasma Membrane" Naturwissenschaften.
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[Publications] Tomonori Shiraishi: "Suppression of pisatin accumulation by an inhibitor of protein kinase" Phytopath.Soc.Jpn.
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[Publications] Y-H.Ko: "Studies on the elicitation of defense mechanisms in plant diseases--L-phenylalanine ammonia-lyase from Pisum satirum" Phytopath.Soc.Jpn.
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[Publications] 山田哲治: "高等植物の情報発現と制御" 丸善, 22 (1990)
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[Publications] T.YAMADA: "Interactions between plants & microorganisms" Proceedings of a JSPS-NUS Interfaculty Seminar, 14 (1989)
