1988 Fiscal Year Annual Research Report

無脊椎動物の体液凝固と異物処理機構の研究

Research Project

Project/Area Number	62480453
Research Institution	Kyushu University
Principal Investigator	岩永貞昭九州大学, 理学部, 教授 (90029942)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	宮田敏行九州大学, 理学部, 助手 (90183970)
Keywords	カブトガニ血球 / 体液凝固 / リポ多糖(内毒素) / C因子 / β_2-GP-I様ドメイン / EGF様ドメイン / セリンプロテアーゼチモーゲン / コアギュローゲン
Research Abstract	カブトガニ血球は、細菌内毒素(LPS)と反応し、瞬時に脱顆粒、続いて体液凝固を起こす。この凝固反応は顆粒内に存在する3種のセリンプロテアーゼ前駆体とゲル化タンパク質(コアギュローゲン)が関与するカスケード機構からなる。このカスケードの開始因子であるFactor CはLPSによって活性化される新しいタイプのプロテアーゼ前駆体である。本年度は、血球よりcDNAライブラリーを調製し、抗体を用いたスクリーニングにより、Factor Cの全領域を含むクローンを得、その全塩基配列を決定した。その結果、Factor Cは25残基のリーダー配列、664残基のH鎖、72残基のA鎖、232残基のB鎖、を有することが明らかとなった。さらに、Factor Cのアミノ酸配列を他のタンパク質と比較したところ、哺乳類補体系因子や血液凝固因子のN末端領域に存在する成長因子様ドメインのほか、補体系因子、β_2-Glycoprotein I、凝固XIII因子bサブユニット等で知られている約60残基のくり返し構造が5個見い出された。また、N末端120残基内にCys-rich領域が、さらにC末端側にPro-rich領域が含まれることが明らかとなった。B鎖はセリンプロテアーゼとの相同性がみられた。以上のことから、Factor Cは無脊椎動物の補体系因子の1種であることが強く示唆された。上記の研究と平行して、H鎖中のLPS結合部位を同定するため、Factor Cをリシルエンドペプチダーゼで消化した。その後、22kDaと15kDa断片がFactor Cから遊離し、いずれもLPSと分子複合体を形成することがわかった。また、22kDa断片のN末端配列はH鎖のそれと一致した。したがって、H鎖のN末端側のCys-rich領域、成長因子様ドメイン、最初のβ_2-Glycoprotein I様ドメイン内にLPS結合部位が存在すると推定した。