トキソプラズマ抗原遺伝子の構造と発現

1988 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 62570173
• Research Institution: Shinshu University
• Principal Investigator: 菅根 一男 信州大学, 医学部, 教授 (50112488)
• Keywords: トキソプラズマ / 抗原遺伝子 / 翻訳産物

Research Abstract

トキソプラズマ症の免疫診断への実用化を目的としてToxoplasma gendii抗原蛋白のcDNAのクローニングをおこなった。tachyzoite由来のmRNAをrabbit reticulocyte lysateをもちいてin vitro翻訳をおこない、合成された蛋白を感染ヒト血清をもちいて免疫沈澱した結果、抗原活性をもつ27KD、31KDおよび35KDの分子量の蛋白を認めた。この中で、27KD蛋白は最も強く感染血清と反応し、診断用抗原として有効と考えられた。そこで、この蛋白のcDNAを得るためtachyzoie由来λgt11cDNA expression libraryを作製し、感染ヒト血清をもちいて免疫学的スクリーニングをおこなった。3×10^4個のクローンをスクリーニングし、26個の陽性クローンを得た。この中から27KD蛋白をコードするクローンを同定するためにepitope selectionをもちいて感染血清中からクローン特異的な抗体を分離した。この抗体を翻訳産物と反応させて抗原とcDNAの対応関係を調べた。その結果、27KD蛋白に対応するcDNAクローン(λTg18)を同定した。そこで、27KD抗原遺伝子の構造と発現について調べるため、このcDNAをプローブとして、tachyzoite由来のゲノムDNAおよびmRNAをもちいてSouthernおよびNorthern blot assayをおこなった。その結果、27KD蛋白はゲノムDNAの約13KDのEcoRI断片にコードされ、約1400ヌクレオチドのRNAとして転写されることが示された。このRANより翻訳された蛋白は、27KDと32KDの蛋白としてtachyzioteに存在することが、Nativeな蛋白をもちいたWestern blot assayの結果、明らかとなった。大腸菌に合成させたλTg18とβ-galactosidaseの融合蛋白はI・gondit感染血清と特異的に反応し、他の原虫感染血清とは交叉反応を認めなかった。さらに、cDNAの塩基配列を決定し、174アミノ酸残基のopen reading frameをλgT11のβ-galactosidase遺伝子とin frameの状態で認めた。既知の遺伝子との相同性は認められなかった。

Research Products

• [Publications] Matsuura,T;Sugane,K.: Molecular and Biochemical Parasitology.
• [Publications] Matsuura,T;Sugane,K.: Molecular and Biochemical Parasitology.