1987 Fiscal Year Final Research Report Summary
培養OK細胞を用いた副甲状腺ホルモンによるcAMP産生以後の作用機構解明
| Project/Area Number |
62570287
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| Research Category |
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Legal medicine
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
上田 尚彦 大阪大学, 医学部, 助手 (70115997)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
福原 吉典 大阪大学, 医学部, 助手 (90165308)
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| Project Period (FY) |
1987 – 1988
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| Keywords | OK細胞 / 副甲状腺ホルモン / 蛋白合成阻害剤 / リン輸送 / cAMP / 解糖 / 糖新生系 / LLcPK_1 / vesicle |
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| Research Abstract |
1.OK細胞はそのリン輸送が副甲状腺ホルモン(PTH)による調節をうける点で以下の研究に適した系である. 本年度は上皮細胞培養で世界の第一人者である米国Nctional Inotitotes of HealthのJ.S.Handlor博士より培養OK細胞の供与をうけ, 当研究施設においても培養条件を確立した. OK細胞は10%牛胎児血清加DMEM培地にて約4〜7日でconfkuentの状態となり, 実験系への安定した細胞供給が可能となった.
2.PTHに対するOK細胞の感受性を検討するため, PTH添加後のCAMPを測定し, CAMP上昇より感受性のあることを確認した.
3.whole dellでのリン輸送測定系では, 現在一定時間incubation後の反応停止条件, 細胞膜やdishの非特異的の吸着の補正法う検討中である, また, 他の尿細管培養細胞LLCPK_1をの比較も試みつつある.
4.apical mpmbrane vesileの調整は, 最近まで安定した細胞供給ができなかたため, 十分な検討は行てっていないが, 既にvesile調整に関しては他の系で豊富て経験があるので, vesile単離精製技術は確立できるものと考える.
以上の点をふまえ, 今後のpTHによるリン輸送亢進の定量的解析を行なう. OK細胞に蛋白合成阻害剤であるparomgcin,redinomycin D,cyclobeximideを添加, 非添加した系でPTH作用回復過程を比較検討する. 培養細胞よりRNAを抽出し, OK細胞において解糖系および糖新生系酵素であるpgsuvade kinase,phospbrenslpyruvato carbaxykinaseのmRNAの発現を検討する. これらが確認されれば, 培養液pH変化, O_2濃度変化時のmRNAレベルの変動について検討を加える.
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[Publications] Enyu Imai: Metabolism. 36. 101-606 (1987)
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[Publications] Hajime Nakahama: Eus. J. Clin.pharwacol.32. 313-315 (1987)
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[Publications] Masahiro Yanase: Nephron. 48. 80- (1988)
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[Publications] Atsuaki Yamasaki: Am. J. Plysiol.(1988)
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[Publications] Hajime Nakahama: Nephron. (1988)
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[Publications] Masaru Horio: Biochim. Bioplys. Acda.
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[Publications] Yoshimasa Orita: "Wiusetics II;Cheristry, Phesmaeology and Clinical Applications" J.B.Pasahett and A.Greenberg eds. Elsevics Sei. Pub., New York, 569 (1987)
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[Publications] Toshiki Mariyama: "Arincgly coside antibuotics inhibit Net-dependent S-glueose Transport in rabbit rei I brusbrborder membrane Usicl" The 1987 International Cangress on Membrames and Membrme-Processes, JCOM '87, Tokyo, 853 (1987)
