ヒトII型糖尿病モデルNONマウスにおけるインスリン遺伝子の解析

1987 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 62570507
• Research Institution: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• Principal Investigator: 大角 誠治 富山医科薬科大学, 医学部, 助手 (90144287)
• Keywords: インスリン非依存性糖尿病 / 動物モデル / NONマウス / 遺伝子ライブラリー / インスリン遺伝子 / 遺伝子クローニング

Research Abstract

62年度の研究計画は, (1)インスリン非依存性糖尿病動物モデルNONマウス遺伝子ライブラリーの作製と, (2)NONマウスインスリン遺伝子をクローン化することであった.
まず, 私はNONマウス肝より高分子DNAを抽出し, 湿重量約1gの肝より6〜9mgの高分子DNAを得た. この高分子DNAを制限酵素MboIで部分水解し, 蔗糖密度勾配遠心法により約20KbpのDNA断片を得た. この20Kbp断片をバクテリアファージLamda Dashをarmとし, T_4Ligaseを用いてBam HI siteに挿入し, 組換え遺伝子を作成した. この組換え遺伝子を次にKit(Giga pack Gold^<【O!R】>)を用いてin vitro packagingを行い, 成熟ファージを作成した. この操作により1.1×10^6pfuのNONマウス遺伝子ライブラリーを得たが, このライブラリーをVCS257をホストとしてamplifyし, 約1万倍(1.6×10^<10>pfu)の遺伝子ライブラリーを完成した.
次に, この遺伝子ライブラリーよりインスリン遺伝子をクローン化するため, rat proinsulin I cDNAをprobeとして, 上記遺伝子ライブラリーを現在スクリーニング中である. 6×10^5pfuに対する一次スクリーニングでは51個のシグナル陽性プラークを得ており, 更にこのファージを3次スクリーニングまで行い, インスリン遺伝子のクローン化も本年度内に終了する予定である.

Research Products

• [Publications] 大角誠治, 森岡尚夫, 沢丞, 矢野三郎, 山本博, 岡本宏, 栩野義博: 糖尿病動物(医薬ジャーナル社). 1. 162-167 (1987)
• [Publications] S. Ohgaku;H. Yamamoto;H. Okamoto;Y. Yochino: The IV th Japan - Korea symposium on Diabetes Mellitus International Congress Series NO. 754(Excerpta Medica, Amsterdam). 133-136 (1987)
• [Publications] 大角誠治, 森岡尚夫, 沢丞, 矢野三郎, 山本博, 岡本宏, 栩野義博: 糖尿病動物(医薬ジャーナル社). 1988 (2)