B型肝炎ウイルス表面抗原遺伝子の分子修飾による発現様式の動態-ワクチニアウイルスベクターを用いて-

1987 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 62571005
• Research Institution: 国立予防衛生研究所
• Principal Investigator: 小島 朝人 国立予防衛生研究所, 病理部, 主任研究官 (30100077)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 斉藤 晴一 国立予防衛生研究所, 血液製剤部, 主任研究官 (80072883) ; 千葉 丈 国立予防衛生研究所, 病理部, 主任研究官 (30100085) ; 田村 慎一 国立予防衛生研究所, 病理部, 室長 (20100084) ; 倉田 毅 国立予防衛生研究所, 病理部, 部長 (50012779)
• Keywords: B型肝炎ウイルス / 遺伝子組換え / ワクチニアウイルスベクター / 表面抗原遺伝子発現

Research Abstract

B型肝炎ウイルス表面抗原(HBsAg)遺伝子のワクチニアウイルスベクターにおける発現様式を検討するため, HBsAg遺伝子組換えワクチニアウイルスを作製した. HBsAg遺伝子はpBRHBadr72クローンよりPre-S領域を含まないS領域のゲノムDNA断片をサブクローニングし, 別にクローニングしておいたワクチニアウイルスのチミジンキナーゼ(TK)遺伝子Ecori切断部位にそのまま挿入した挿入プラスミドベクター, 及びワクシニアウイルス7.5K蛋白質のプロモーター(P_<7.5>)下流に連結したP7.5-HBsキメラDNAとして上記TK遺伝子中に挿入した挿入プラスミドベクター作製用に供した. これら挿入ベクターを用いて相同組換え法によりHBs遺伝子組換えワクシニアウイルスの作出を行なった. 組換えウイルスにおけるHBsAg産生量はP_<7.5>をHBs遺伝子に連結した場合に極めて高く, TK遺伝子中にそのまま挿入しTKのプロモーターを利用した場合は癌跡程度であった. 高産生組換えウイルス由来のHBs抗原蛋白質の解析を行なった結果, 密度(d=1.188), 構成蛋白質が25K蛋白質と28K糖蛋白質から成ること, ヒト抗HBs抗体に対する抗原性等, いずれにおいてもヒト血漿由来HBs抗原と同様の性質を示した. また, ワクチノアウイルスにおいて発現されたHBsAgは培養感染細胞内から容易に培地中に放出されヒトHBsAgと同様の小型粒子を形成した.
一方, 高等動物細胞膜表面抗原としてラットThy-1抗原蛋白質について, そのCDNAクローンを作製し, 遺伝子レベルでpoly-Aシグナルの有無, トランスメンブレンドメインの削除等の分子修飾を加えた. これらのThy-1遺伝子についてP7.5と連結したキメラDNAあるいは各々単独で上記の方法に従い, Thy-1遺伝子組換えワクチニアウイルスを作製した. 抗体Thy-1抗体を用いて組換えウイルスのよるThy-1抗原の発現の動態について解析が進行している.

Research Products

• [Publications] Morita,M.: Vaccine. 5. 65-70 (1987)
• [Publications] 小島 朝人: 微生物. 3. 220-232 (1987)
• [Publications] 小島 朝人: 医学のあゆみ. 142. 670-674 (1987)
• [Publications] 安田 幹司: 日本臨床. 45. 2342-2348 (1987)
• [Publications] 小島 朝人: 最新医学. 43. 466-473 (1988)