1987 Fiscal Year Annual Research Report
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62580161
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| Research Institution | Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research |
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Principal Investigator |
柿沼 カツ子 財団法人東京都臨床医学総合研究所, 炎症研究部門, 室長 (30109946)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤井 博匡 財団法人東京都臨床医学総合研究所, 炎症研究部門, 研究員 (70209013)
千葉 司 財団法人東京都臨床医学総合研究所, 炎症研究部門, 研究員 (20188486)
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| Keywords | 白血球 / 活性酸素生成酵素 / NADPH oxidase / FAD酵素 |
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| Research Abstract |
白血球の活性酸素生成酵素(NADPH oxidase)は, その活性基種について諸説があるが, 膜のNADPH oxidaseを可溶化し, 等電点電気泳動より分離したpI5.0分画が, NADPH oxidase固有の諸性質を示すFAD酵素であることを明らかにした.
本年は, このFAD酵素のNADPH及びO_2との反応を明らかにするために, pI5.0分画の大量分離法を確立した. 方法は, 粒状ゲルの調整用平板等電点電気泳動(LKBマルチフォーII)を用いた. FAD酵素の収率を上げるために, 泳動中のゲル内温度を低温(1.5°C)に維持し, そのために低温下でもCMC値の変化しない界面活性剤を用いて, 泳動方法に諸改良を行って分離した.
1)NADPHとの反応のKinetics FAD酸素(pI 5.0)のNADPHに対するKm値を、 cytochrome c peroxidase(CCP)のH_2O_2との複合体(CCP-H_2O_2)の生成活性で測定した。その結果、Km(NAD2DPH)は30±13μMの値が得られた。NADPHの酸化量とHは_2O_2生成量1:1のモル比となり、膜結合のNADPH oxidaseの場合と一致した。本酸素はNADPHとは反応せず、NADPHにNADPHに特異的であり、昨年度の報告と総合すると、NADPHの電子D2と受容部位の酸素であると考えられる。
2)O_2の反応のKinetics FAD酸素(pI 5.0)は、NADPH存在下で、 superoxid dismutase(SOD)非感受性のcytochrome c還元反応を示すので、O^-_2生成活性をこの方法では検討することが出来ない。そのために、O^-_2ラジカルのESRスペクトルを直接測定した。その結果、NADPH酸化反応にとDD1もなって、顕著にO^-_2生成活性を示したので、このFAD酸素はNADPHより2e-受け取り、Oにずつ2e^-渡すdehydrogenase-electron transferase型であることが推定できた(第4回 国際フリ-ラジカル学会 4月13〜19日 京都国際会議場で発表)。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] K. Kakinuma: J. Biol. Chem.262. 12316-12322 (1987)
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[Publications] A. Hata-Tanaka: FEBS Lett.214. 279-284 (1987)
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[Publications] T. Chiba: Biochim. Biophys. Acta. 930. 10-18 (1987)
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[Publications] 千葉 司: 災症. 7. 517-521 (1987)
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[Publications] 柿沼 カツ子: "ファゴサイトーシス,『新生理学大系』(勝木保治,内園耕二 監修),第3巻 膜輸送の生理学(星猛,香川靖雄 編)" 医学書院, 9 (1987)
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[Publications] 柿沼 カツ子: "29・2・3 過酸化水素生成の測定 29・3糖代謝の変化,32・1 NADPIIオキシダーゼ活性の測定,『続生化学実験講座』第8巻 血液(下)(日本生化学会)" 東京化学同人, 17 (1987)
