1989 Fiscal Year Annual Research Report
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63440004
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| Research Institution | Tokyo Institute of Technology |
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Principal Investigator |
岸本 健雄 東京工業大学, 理学部, 教授 (00124222)
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| Keywords | 卵成熟促進因子 / MPF / サイクリン / cdc2 / suc1 / ヒトデ卵 / M期 / 細胞周期 |
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| Research Abstract |
MPF(卵成熟促進因子)は、当初、卵成熟誘起ホルモンの卵表での作用を卵内で仲介して核膜崩壊と染色体凝縮を誘起する活性として同定されたが、その後、真核細胞に共通の分裂中期誘起蛋白質と判明している。本研究の目的は、こうしたMPFをヒトデ卵から精製して、その本体を明らかにすることにある。
MPFに関するごく最近の研究の世界的な急進展により、MPF分子には分裂酵母cdc2遺伝子産物ホモログと分裂期特異的蛋白質サイクリンとがサブユニットとして含まれていると考えられ始めている。ヒトデ・サイクリンについては、筆者らは昨年度にそのcDNAをクロン化したので本年度にはまずその塩基配列を決定した。その結果、ヒトデ・サイクリンは、395アミン酸からなり、B型に属して、予測される分子量は48kdと判明した。さらにクロン化したヒトデ・サイクリンcDNAを大腸菌に組込み、過剰発現させた蛋白質を抗原として抗サイクリン抗体を得た。
分裂酵母の遺伝学的解析から、cdc2遺伝子産物はsuc1遺伝子産物と相互作用をもつことが示されている。そこでsuc1蛋白質を大腸菌で過剰発現させ、精製後、Sepharose4Bに結合させてsuc1ーアフィニティカラムを作製した。これにイトマキヒトデ粗MPF分画を添加すると、MPF活性はゲルに保持され、その後suc1蛋白質を含む溶液によって特異的に溶出された。このMPF分画をSDSーPAGE後銀染色によって調べたところ、suc1溶液からもちこまれた不純物のほかには、cdc2蛋白質とサイクリンに相当するバンド以外はほとんどなく、1ステップでほぼ完全に近いMPF精製を達成することに成功した。さらにこの精製MPF分画について抗サイクリン抗体で免疫沈殿したところ、それには脱リン酸化型cdc2蛋白質が含まれることが判明した。従って、MPF分子中では脱リン酸化型cdc2蛋白質とサイクリンとが複合体を形成しているといえる。
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[Publications] F.Shilling: "Pertussis toxin inhibits 1-methyladenine-induced maturation in starfish cocytes." Developmental Biology. 133. 605-608 (1989)
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[Publications] N.Hashimoto: "Thiol protease inhibitor,E-64-d,prevents spindle formation during mouse oocyte maturation." Development,Growth&Differentiation. 32. (1990)
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[Publications] K.Tachibana: "Starfish egg mRNA responsible for reinitiation of meiotic maturation encodes cyclin." Developmental Biology. (1990)
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[Publications] 岸本健雄: "分裂期における細胞周期の調節機構" 蛋白質・核酸・酵素. 34. 1599-1609 (1989)
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[Publications] T.Kishimoto: "Proceedings of the XIth International Symposium on Comparative Endocrinology.(Hormonal control of oocyte maturation in echinoderms)." Eds.,A.Epple,C.G.Scanes and M.H.Stetson Alan R.Liss,Inc.,New York, (1990)
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[Publications] K.Tachibana: "Advances in Invertebrate Reproduction,Vol.5.(Molecrlar cloning and sequencing of starfish cyclin cDNA)." Elsevier Sci.Pub.BV,Amsterdam, (1990)
