1990 Fiscal Year Annual Research Report

カルパイン及びカルパスタチン遺伝子発現検査技術の開発と病因病態解析への応用

Research Project

Project/Area Number	63440083
Research Institution	Kyoto University
Principal Investigator	安達喜文京都大学, 医学部, 助手 (50201893)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	牧正敏京都大学ウイルス研究所, 助教授 (40183610) 畑中正一京都大学ウイルス研究所, 教授 (30142300) 野阪哲哉京都大学ウイルス研究所, 助手 (30218309) 神奈木玲児京都大学, 医学部, 講師 (80161389) 上田國寛京都大学, 医学部, 助教授 (00027070)
Keywords	カルパイン / カルパスタチン / 遺伝子発現 / ELISA / cDNA / mRNA / 病因病態解析 / モノクロ-ナル抗体
Research Abstract	〔目的〕カルパインは細胞内Ca^<2+>依存性システインプロテア-ゼで,カルパスタチンはその内因性特異インヒビタ-である。両者の遺伝子発現の動態を遺伝子DNA,mRNA及びタンパク質レベルで解析する技術を開発し,これらを臨床検査として実用化する基礎研究を行い,各種患者についての新しい病因病態情報を集収することが本研究の目的である。〔経過および成果の概要〕ヒト型のカルパインI,II及びカルパスタチン遺伝子を単離し,各遺伝子に対する特異的cDNAプロ-ブを作成した。また、遺伝子構造と機能の関係を詳細に研究し,カルパインI,IIの大サブユニット及びカルパスタチンの機能ドメインに特徴的なアミノ酸配列部位を化学合成し,これらオリゴペプチドを抗原として,それぞれに対する高度特異的モノクロ-ナル抗体を得た。これら抗体を用い,各組織及び疾患におけるカルパインーカルパスタチンの分布、変動を探るサンドイッチ方式のELISA測定系を確立した。造血系細胞及び神経系細胞における各因子の発現をmRNA,タンパク質,酵素活性の各レベルで解析した結果,HTLVーI感染によりカルパインII遺伝子がトランスに活性化されることが判明した。遺伝子DNA上の転写制御領域については現在研究中である。また、他の病態疾患との関連性についても研究を進める必要がある。これら主研究に付随して,カルパスタチンは細胞内でリン酸化されるタンパク質であること,カルパインの一部は細胞膜と結合することなども明らかとなった。さらにカルパイン特異的インヒビタ-及び合成カルパスタチンペプチドを細胞内に導入することにも成功した。今後,諸条件を検討し,カルパインーカルパスタチン系の生理的意義を検索していくことも重要な課題である。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] 安達喜文: "Calpain Inhibitors Block TPAーDependent DownーRegulation of Protein Kinase C" Biomedical Research. 11. 313-317 (1990)
[Publications] 上森隆: "Characterization of a Functional Domain of Human Calpastatin" Biochemical and Biophysical Research Communication. 166. 1485-1493 (1990)
[Publications] 李雲柱: "Factors Influencing the Binding of Calpain I to Human Erythrocyte InsideーOut Vesicles" Biochemistry International. 22. 163-171 (1990)
[Publications] 木下政人: "Significant Amount of Multicatalytic Proteinase Identified on Membranes from Human Erythrocyte" Journal of Biochemistry. 107. 440-444 (1990)
[Publications] 佐々木隆志: "Inhibitory Effect of Diーand Tripeptidyl Aldehydes on Calpains and Cathepsins" Journal of Enzyme Inhibition. 3. 195-201 (1990)
[Publications] 浜窪隆雄: "Distributional and Developmental Variations of Multiple Forms of Calpastatin in Mouse Brain" Journal of Enzyme Inhibition. 3. 203-210 (1990)

1990 Fiscal Year Annual Research Report

カルパイン及びカルパスタチン遺伝子発現検査技術の開発と病因病態解析への応用

Principal Investigator

安達 喜文 京都大学, 医学部, 助手 (50201893)

Research Products

[Publications] 安達 喜文: "Calpain Inhibitors Block TPAーDependent DownーRegulation of Protein Kinase C" Biomedical Research. 11. 313-317 (1990)

[Publications] 上森 隆: "Characterization of a Functional Domain of Human Calpastatin" Biochemical and Biophysical Research Communication. 166. 1485-1493 (1990)

[Publications] 李 雲柱: "Factors Influencing the Binding of Calpain I to Human Erythrocyte InsideーOut Vesicles" Biochemistry International. 22. 163-171 (1990)

[Publications] 木下 政人: "Significant Amount of Multicatalytic Proteinase Identified on Membranes from Human Erythrocyte" Journal of Biochemistry. 107. 440-444 (1990)

[Publications] 佐々木 隆志: "Inhibitory Effect of Diーand Tripeptidyl Aldehydes on Calpains and Cathepsins" Journal of Enzyme Inhibition. 3. 195-201 (1990)

[Publications] 浜窪 隆雄: "Distributional and Developmental Variations of Multiple Forms of Calpastatin in Mouse Brain" Journal of Enzyme Inhibition. 3. 203-210 (1990)

安達喜文京都大学, 医学部, 助手 (50201893)

[Publications] 安達喜文: "Calpain Inhibitors Block TPAーDependent DownーRegulation of Protein Kinase C" Biomedical Research. 11. 313-317 (1990)

[Publications] 上森隆: "Characterization of a Functional Domain of Human Calpastatin" Biochemical and Biophysical Research Communication. 166. 1485-1493 (1990)

[Publications] 李雲柱: "Factors Influencing the Binding of Calpain I to Human Erythrocyte InsideーOut Vesicles" Biochemistry International. 22. 163-171 (1990)

[Publications] 木下政人: "Significant Amount of Multicatalytic Proteinase Identified on Membranes from Human Erythrocyte" Journal of Biochemistry. 107. 440-444 (1990)

[Publications] 佐々木隆志: "Inhibitory Effect of Diーand Tripeptidyl Aldehydes on Calpains and Cathepsins" Journal of Enzyme Inhibition. 3. 195-201 (1990)

[Publications] 浜窪隆雄: "Distributional and Developmental Variations of Multiple Forms of Calpastatin in Mouse Brain" Journal of Enzyme Inhibition. 3. 203-210 (1990)