遺伝性血液疾患の病因と治療に関する分子遺伝学的アプロ-チ

1989 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 63480137
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 服巻 保幸 九州大学, 遺伝情報実験施設, 助教授 (90128083)
• Keywords: サラセミア / PCR法 / 変異 / 多型 / トランスジェニックマウス / 遺伝子発現

Research Abstract

前年度行なったサラセミアの解析をさらに進め、日本人ならびにマレ-シア人のβサラセミアを対象に、先に報告したPCR法を用いて、変異を明らかにした。マレ-シアにおいては11種類の変異が見いだされた。このなかでマレ-人に特異的な変異はcodon15フレ-ムシフト変異のみで残りは、中国人や、インド人に見いだされた変異であった。ただ例外があり黒人で報告されている、3'RNA切断シグナルの変異が検出された。多型の解析より、独立に生じた変異と考えられた。日本人のサラセミアにおいては日本人特有の変異が6個見いだされた。特に第3エクソン内の変異が2種類見いだされ、いずれも極めて不安定なβグロビン鎖のためにサラセミアを来たすことが明らかになった。これらは東南アジアのサラセミアでは見られない新しいタイプの変異である。この変異はヘテロ接合体でも高度な溶血性貧血を来たすためマラリアに対する利点がなく、マラリアの頻発する地域では見られないのであろう。また中国人からマイグレ-トしたと考えられる変異も2種類見いだした。一方黒人で報告されている変異も1種類存在したが、多型の解析から変異が多発したものと推測された。ヒトAγグロビン遺伝子とβグロビン遺伝子とをタンデムに連結した分子を作成した。これを受精卵に導入し、トランスジェニックマウスを単離しグロビン遺伝子の発現を検討した。上記組換え体のクロモゾ-ムへの挿入が確かめられた5系統のうち3系統においてグロビン遺伝子の発現が造血組織のみにおいて見られた。その中で1系統は成体期において、ヒトβグロビン遺伝子の発現が、内因性のグロビン遺伝子の118%にも及んでいた。このトランスジェニックマウスの詳細な解析により、グロビン遺伝子はその断片のみで組織特異的かつ発生のステ-ジ特異的な発現をすることが確かめられた。

Research Products

• [Publications] Satoshi Shiokawa: "Heterogeneity of the β-globin gene sequences in Japanese individuals:implication of gene conversion in generation of polymorphisms." Journal of Biochemistry. 105. 184-189 (1989)
• [Publications] Shunji Tomatsu: "The organization and the complete nucleotide sequence of the human NADH-cytochrome b5 reductase gene." Gene. 80. 353-361 (1989)
• [Publications] Supan Fucaroen: "A novelochre mutation in the β-thalassemia gene of a Thai:identification by direct cloning of the entire β-globin gene amplification using polymerase chain reaction." Journal of Biological Chemistry. 264. 7780-7783 (1989)
• [Publications] Supan Fucharoen: "Molecular basis of β-thalassemia in Thailand:analysis of β-thalassemia mutations using polymerase chain reaction." Human Genetics. 84. 41-46 (1989)
• [Publications] Johji Hirata: "A novel CD10-positive erythroid cell line,RM10,established from a patient with chronic myelogenous leukemia." Cancer Research. (1990)
• [Publications] Supan Fucharoen: "Molecular heterogeneity of β-thalassemia in the Japanese:identification of two novel mutations." British Journal of Haematology. (1990)
• [Publications] Yasushi Kobayashi: "Serine-proline replacement at residue 127 of NADH-cytochrome b5 reductase causes hereditary methemoglobinemia,generalized type." Blood. (1990)
• [Publications] Eiji Matsunaga: "Molecular analysis of the gene of the α1-antitrypsin deficiency variant,Mnichinan." American Journal of Human Genetics. (1990)
• [Publications] Supan Fucharoen: "Characterization and nonradioactive detection of β-thalassemia in Malaysia." Acta Hematologica. (1990)
• [Publications] Toshitsugu Ubisui: "Structural analysis of NADH-cytochrome b5 reductase in relation to hereditary methemoblobinemia,in The Red Cell" Alan R.Liss,inc.,15 (1989)