造血幹細胞増殖分化における幹細胞-骨髄間質細胞間細胞膜接着分子の精製と機能解析

1988 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 63480141
• Research Institution: Chiba University
• Principal Investigator: 張ケ谷 健一 千葉大学, 医学部, 助教授 (40101894)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 半田 宏 千葉大学, 医学部, 助教授 (80107432)
• Keywords: 細胞膜接着分子 / 骨髄間質細胞株 / 造血細胞増殖分化

Research Abstract

本研究の当該年度の目的は機能を持ったヒト骨髄間質細胞株をヒト造血細胞株を用い、それら細胞膜に存在する細胞接着分子を同定、精製することである。<成果>ヒト骨髄間質細胞株(KM-101、102)、および骨髄系血液細胞株(CMK7、HL-60、K562、KOPM、HEL、U937)を免疫源としてBald/cマウス腹腔に繰り返し接種することによりモノクロナール細胞膜抗体を産生するハイブリドーマを作製した。このうちの2クローンはin vitroの間質細胞-血液細胞株の接着をきわめて強く増強した。ヒト間質細胞株の膜成分を可溶化後、この抗体を用いてウェスタン・ブロッティングを行なったところ、一つの抗体(C-F-9)は、膜蛋白非還元の条件で分子量約22万の分子を認識した。しかし、膜蛋白を還元した試料では明確なバンドは得られなかった。C-F-9ハイブリドーマはIgG_1サブクラスの抗体を産生し、このハイブリドーマをマウスの腹水系にして大量の抗体を得てからこれを精製した。精製抗体をパパインにて処理し、Fabフラグメントを作製し、in vitroのヒト骨髄間質細胞株-骨髄系血液細胞間の接着阻止試験を行なったところ、抗体そのものでは接着増強がみられたが、抗体Fabフラグメントの処理により、接着の阻止を観察することができた。更に、この精製抗体をSepharose 4B CLの担体にカップリングし、抗原の精製を試みた。精製抗原を還元、非還元の条件でSDS-PAGEにて電気泳動を行なったところ非還元の蛋白試料は分子量約22万の単一のバンドとして認識され、還元状態の試料は分子量11万と10万5千の2本のバンドとて認識された。以上の結果は、この分子がhetero dimerの分子から成り、Reterophilicな細胞間の接着に関与する分子であることを示唆する。現在、この分子のアミノ酸配列の検索、遺伝子のクローニングを計画中である。

Research Products

• [Publications] Klhama.T;Handa.H;Harigaya.K: Experimental Hematology. 16. 603-608 (1988)
• [Publications] FitzGerald.TJ;Santucc.MA;Harigaya.K;et al.: International Journal Radiation Oncology Bioloby Physics. 15. 1153-1159 (1988)
• [Publications] Ohkawa.H;Mikata.A;Harigaya.K;Ueda.R: Experimental Hematology. 17. 30-33 (1989)