腸管感染原因菌の産出する細胞破壊毒の病原性の分子生物学的研究

1990 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 63480154
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 三輪谷 俊夫 大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (60029759)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 余 明順 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (70093482) ; 有田 美知子 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (10127178) ; 山本 耕一郎 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (30158274) ; 本田 武司 大阪大学, 微生物病研究所, 助教授 (60029808)
• Keywords: 腸炎ビブリオ / 細胞破壊毒 / 構造と機能 / キメラ毒素 / TDH

Research Abstract

1.細胞破壊毒の分離精製
前年度に引き続き腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒(TDH)類似毒素のうち<Vibrio>___ー <mimicus>___ーの産生するVmーrTDHをはじめ、腸炎ビブリオの産生する新しい毒素(TDH/Iと名付けた)、さらに、大腸菌にクロ-ニングしたTDH様毒素遺伝子(4種類)の産物であるTDH1〜4pを精製し、それらの諸性状を互いに比較しながら明らかにした。
2.細胞破壊毒の構造と機能相関の解析
上述の数種類のTDH類似毒素の構造はDNA解析から、一部(VhーrTDH)は、精密蛋白解析から明らかになり、互いのアミノ酸一次配列が比較できるようになり、機能との関連部位の推定を行った。また、変異毒素の作成と解析や毒素の化学修飾実験から、Trp65やGly90が生物活性発現上重要な構造であることを明らかにした。また、合成ペプチドを作成することにより、毒素活性の一部を再現することで80ー99のアミノ酸残基が毒素の膜との結合に重要な構造であることが推察できた。さらに、TDH/TRH毒素間のキメラ毒素を作ることにより、血球感受性の機能を担う部位(N末端から33番目から89番目)を特定することができた。また、同様にTDHが持ちTRHが持たない耐熱性蛋白という特異な性状を蛋白に賦与する構造の解析も進めることができた。

Research Products

• [Publications] Honda,T.,et al.: "Production and characterization of monoclonal antibodies to a pilus colonization factor (colonization factor antigen III) of human enterotoxigenic <Escherichia>___ー <coli>___ー." Infect.Immun.57. 3452-3457 (1989)
• [Publications] Yoh,M.,et al.: "Homogeneity of a hemolysin (VhーrTDH) produced by clinical produced by clinical and environmental isolates of <Vibriohollisae>___ー." FEMS Microbiol.Lett.61. 171-176 (1989)
• [Publications] Tsuji,T.,et al.: "Charge heterogeneity of heatーlabile enterotoxins from human enterotoxigenic <Escherichia>___ー <coli>___ー." FEMS Microbiol.Lett.61. 1-6 (1989)
• [Publications] Yoh,M.,et al.: "Comparative amino acid sequence analysis of hemolysins produced by <Vibrio>___ー <hollisae>___ー and <Vibrio>___ー <parahaemolyticus>___ー." J.Bacteriol.171. 6859-6861 (1989)
• [Publications] Honda,T.,et al.: "Production of monoclonal antibody against a hemolysin (VpーTRH) produced by <Vibrio>___ー <parahaemolyticus>___ー." FEMS Microbiol.Lett.68. 167-170 (1990)
• [Publications] Tsuji,T.,et al.: "A heatーlabile enterotoxin (LT) purified from chicken enterotoxigenic <Escherichia>___ー <coli>___ー is identical to poruine LT." FEMS Microbiol.Lett.67. 329-332 (1990)
• [Publications] Honda,T.,et al.: "Properties of a hemolysin related to the thermostable direct hemolysin produced by a Kanagawa phenomenon negative,clinical isolate of <Vibrio>___ー <parahaemolyticus>___ー." Can.J.Microbiol.36. 395-399 (1990)
• [Publications] Tsuji,T.,et al.: "Comparison of coligenoid formation by B subunits of procine and human <Escherichia>___ー <coli>___ー heatーlabile enterotoxins." FEMS Microbiol.Lett.69. 299-304 (1990)
• [Publications] Joya,J.E.,et al.: "Demonstration of enterotoxigenic <Escherichia>___ー <coli>___ー in diarrheic broiler chickes." Eur.J.Epidemiol.6. 88-90 (1990)
• [Publications] Yamamoto,K.,et al.: "Twoーstep processing for activation of cytolysin/hemolysin of <Vibrio>___ー <cholerae>___ー 01,EL Tor; nucleotide sequence of the structural gene and (hlyA) and characterization of the processed products." Infect.Immun.
• [Publications] Tsuji,T.,et al.: "Detection and purification of the free A subunit of heatーlabile enterotoxin produced by enterotoxigenic <Escherichia>___ー <coli>___ー." FEMS Microbiol.,Lett.
• [Publications] Honda,T.,et al.: "Characterization of a new thermostable direct hemolysin produced by a Kanagawa phenomenonーnegative clinical isolate of <Vibrio>___ー <Parahaemolyticus>___ー." J.Gen.Microbiol.
• [Publications] Honda,T.,et al.: "Production of monoclonal antibody against a hemagglutinin/protease of <Vibrio>___ー <cholerae>___ー nonー01." FEMS Microbiol.Lett.
• [Publications] 三輪谷 俊夫: "ビフィズス(2)" (財)日本ビフィズス菌センタ-, 250 (1989)
• [Publications] 三輪谷 俊夫: "日本内科学会雑誌.79(3)" 日本内科学会, 700 (1990)
• [Publications] 三輪谷 俊夫: "感染症学会雑誌.64(7)" 感染症学会, 1262 (1990)
• [Publications] 三輪谷 俊夫: "腸炎ビブリオ第III集(監修.三輪谷俊夫,大橋誠)" 近代出版, 362 (1990)
• [Publications] 三輪谷 俊夫: "消化器外科13(6)" へるす出版, 1560ノウチ1 (1990)