環状DNA解析による新しいT細胞抗原レセプタ-遺伝子の探索

1989 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 63480169
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 山岸 秀夫 京都大学, 理学部 (90025429)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 藤本 真慈 京都大学, 胸部疾患研究所, 助手 (60199370)
• Keywords: 胸腺細胞 / 染色体外環状DNA / TCRγ / Vγの出現頻度 / TCRδ / δ鎖欠失組換え / TEA-Cα不妊RNA / 転写依存型遺伝子再構成

Research Abstract

1.胎児および成熟マウス胸腺細胞により染色体外の環状DNAを精製し、制限酵素によって断片化し、環状DNAライブラリ-をつくると共に、成熟マウス肝臓細胞より染色体ゲノムDNAライブラリ-を用意した。TCRγ鎖遺伝子領域を解析するためにJγ領域のプロ-ブを用いて、環状DNAライブラリ-よりγ鎖由来のクロ-ンを選択し、染色体DNAクロ-ンと比較した。1)胎児胸腺ではJγではJγ1に近いVγ5,Vγ6の再構成した産物がえられるが、成熟胸腺ではJγ1に遠いVγ4,Vγ7の再構成産物がえられる。2)Vγ4の方がVγ7よりも出現頻度が高い。3)成熟胸腺では、Vγ2-Jγ2、Vγ3-Jγ3の遺伝子再構成産物がJγ1の産物より多くなる。4)Vγ2の方が擬遺伝子属するVγ3よりも出現頻度が高い。5)成熟胸腺細胞のVγ/Jγシグナル結合にN塩基の搬入がみられるが、胎児胸腺細胞ではみられない。6)脾臓細胞の環状DNA上のγ鎖シグナル結合は非常に少ない。7)γ鎖遺伝子再構成をN配列の有無とVγの使い分けからみると胎児胸腺と成熟胸腺とではTCRγ鎖を生ずるT細胞の系譜が異ることを示す。
2.TCRδ鎖遺伝子領域についても同様の解析を行った。1)マウスδ鎖遺伝子の欠失に関するシグナル遺伝子として3種類のδRec1、2、3と4Jαを染色体上に固定した。2)4Jαの1kb上流から数10kb下流のCαまで転写し、多様なスプライシングを示す不妊RNA転写物TEA0Cαを固定した。3)TEA-Cαは胎児期胸腺分化途上、δ鎖におくれて発現し、α鎖の出現と共に低下する。4)α鎖遺伝子内に存在するδ鎖遺伝子の再構成開始と共にTEA-Cαも転写され、α鎖のJ領域の染色体構造を解放してδRec/4Jα組換えによっでδ鎖遺伝子を欠失させると共に、ひきつづくα鎖遺伝子再構成を容易にしているものとみられる。今後TEA-Cαの転写を支配し、組換えを活性化する因子の解明がまたれる。

Research Products

• [Publications] Sunao TAKESHITA: "Excision products of the T cell receptor gene support a progressive rearrangement model of the α/δ locus" EMBO Journal. 8. 3261-3270 (1989)
• [Publications] Masaaki TODA: "Excision products of immunoglobulin gene rearrangements" Immunology Letters. 21. 311-316 (1989)
• [Publications] 山岸秀夫: "免疫グロブリン遺伝子由来の環状DNA" 臨床免疫. (1990)
• [Publications] 山岸秀夫: "環状DNAに記録される細胞分化の足跡" 化学と生物. (1990)
• [Publications] 山岸秀夫: "分子生物学の進歩、第10巻免疫学" 丸善株式会社, 78-88 (1989)