1990 Fiscal Year Annual Research Report
環状DNA解析による新しいT細胞抗原レセプタ-遺伝子の探索
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63480169
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
山岸 秀夫 京都大学, 理学部, 助教授 (90025429)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤本 真慈 京都大学胸部疾患研究所, 助手 (60199370)
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| Keywords | 胸腺腫細胞 / TEAーC_α転写物 / CAT解析 / サイレンサ- / TCRトランスγーα組換え / D_βーD_βシグナル結合 / N塩基挿入 / タ-ミナル・ジオキシヌクレオチヂル・トランスクエラ-ゼ活性 |
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| Research Abstract |
X線照射により誘発されたマウス胸腺腫細胞よりDNAとRNAを抽出し,TCR各プロ-ブを用いてサザンおよびノザン解析を行い,δ鎖発現からα鎖発現へのスイッチに関与する遺伝子TEAに関する新しい知見をえると共に、マウス胸腺環状DNA解析から,γ鎖,β鎖に関する新しい遺伝子再配列を同定した。
1)マウス胸腺腫はTCR遺伝子発現からみるとき,T細胞分化の中間段階を示した。そのなかには,αβγδの4種を発現するものもあった。
2)δ鎖を発現している胸腺腫細胞中に4J_αの1Kb上流から数10Kb下流のC_αまで転写され、多様なスプライシングをうけた不稔転写物TEAーC_αを同定した。転写開始点の上流にCATとTATAボツクスを同定した。
3)TEAーC_αの発現は胎児期17日目に最高を示した。すなわち,γ鎖発現のあと,α鎖の発現に先立ち,δ鎖と共に発現した。
4)TEA領域の種々の断片をCATベクタ-にクロ-ニングし,DEAEデキストラン法でαβT細胞株に導入し,CAT解析を行い,転写開始点上流2.4Kb断片にサイレンサ-活性を検出した。α鎖遺伝子再配列を活性化するTEAーC_α転写の抑制に関連するものと思われる。
5)異なる染色体上に存在するV_<γ7>とJ_αのトランス組換え産物を環状DNA上に検出した。単にα鎖の多様性の増大のみならず,新しいV_γのα鎖への導入は自己免疫現象との関連で興味深い。
6)β鎖に関して、新にDDシグナル結合を発見し,DD再配列を実証した。VD,DJシグナル結合も含めて、胎児期ではN塩基挿入はみられなかったが、成熟期では20〜25%の割合で挿入がみられた。このことはタ-ミナル・ジオキシリボヌクレオチド・トランスクエラ-ゼの活性を反映するものである。
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[Publications] Takuji Iwasato: "Circular DNA is excised by immunoglobulin class switch recombination" Cell. 62. 143-149 (1990)
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[Publications] Toshiyasu Hirama: "Structure of extrachromosomal circular DNAs generated by immunoglobulin light chain gene rearrangements" Immunology Letters. 27. 19-24 (1991)
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[Publications] Katsuya Harada: "Lack of feedback inhibition of Vk gene rearrangement by productively rearranged alleles" Journal of Experimental Medicine. 173. 409-415 (1991)
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[Publications] 山岸 秀夫: "T細胞抗原受容体" ファルマメディカ. 印刷中. (1991)
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[Publications] Takuji Iwasato: "Novel excision products of TCR γ gene rearrangements and developmental stage speciticity implied by the freqnency of nucleotide insertions at signal joints"
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[Publications] Eiko Kubo: "F cell maturation arrests characterized by TCR gene reanangemento and oxpression in radiationーinduced thymic lymphomas"
