1989 Fiscal Year Annual Research Report
ヒト甲状腺細胞由来増殖因子の精製-分子生物学的分析と細胞の悪性度との関連性について
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63480265
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
内村 英正 東京大学, 医学部(病), 助教授 (00111500)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
石川 冬木 東京大学, 医学部(病), 助手 (30184493)
久保田 憲 東京大学, 医学部(病), 助手 (50192034)
佐々木 憲夫 東京大学, 医学部(病), 助手 (40143432)
春日 雅人 東京大学, 医学部(病), 講師 (50161047)
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| Keywords | ヒト甲状腺細胞 / TDGF / IGF-I / 成長因子受容体 |
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| Research Abstract |
1.ヒト甲状腺細胞由来成長因子(Thyrocyte-derived growth factor;TDGF)を、培養甲状腺細胞のConditioned Medium中から、FRTL-5細胞のチミジン取込み刺激を指標として、セファクリルS-200によるゲル濾過と、HPLC装置を用いオクタデシル・カラムによる逆相分配クロマトグラフィ-によって、純化・精製した。
2.精製TDGFの物理化学的性質及び生物学的性質を明らかにする目的で、クロラミンT法によって、^<125>Iで標識した。この^<125>I標識TDGFは、2段のゲル濾過法によって、単一ピ-クにまで再度純化された。
3.^<125>I-TDGFを電気泳動法とオ-トラジオグラフィ-によって分析した。^<125>I-TDGFは、SDS-PAGEによって、還元・非還元によらず、見かけ上の分子量4000の位置の単一バンドとして泳動された。また、等電点電気泳動法によって、酸性域のp14.5の位置にやはり単一のバンドとして泳動された。これら2種の電気泳動において、^<125>I-TDGFは、同時に流した^<125>I-IGF-Iと明らかに区別された。
4.^<125>I-TDGFのFRTL-5細胞膜への結合を検討したところ、非標識TDGFによって濃度依存正に抑制される特異的結合を認めた。この^<125>I-TDGFのFRTL-5細胞への結合は、種々の既知の成長因子(IGF-I,IGF-II,EGF,FGF,PDGF,NGF,Insulin,IL-1,TSH)の充分量によっても全く抑制されなかった。また、タイプI IGF受容体を有することが明らかにされているヒト胎盤膜においては、^<125>I-TDGFの特異的結合を認めなかった。
以上のごとく、TDGFの性質分析と純化の作業は順調に進行しており、支配DNAの解明を目指している。
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[Publications] Hidemasa Uchimura: "Thyroid stimulating immunoglobulin assay by solubilized porcine thyroid membrane preparation" The Thyroid 1988. 171-174 (1988)
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[Publications] Yoh Fukue: "Changes in thyroglobulin release-stimulating activity(Tg-RSA)in immunoglobulin G from Patients with Graves'disease during therapy with thianamide drug" The Thyroid 1988. 203-206 (1988)
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[Publications] Ken Kubota: "Growth stimulating activity secreted by cultured human thyrocytes" The Thyroid 1988. 543-546 (1988)
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[Publications] Hidemasa Uchimura: "Effects of thyroid-derived growth factor(TDGF)on DNA synthesis in human thyrocytes in mediated by adenylate cyclase-cAMP system-different mechanism from EGF or IGF-I" Progress in Thyroidology 1989. 69-72 (1989)
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[Publications] Ken Kubota: "Thyrocyte-derived growth factor(TDGF)-a novel growth factor secreted by cultured human Thyrocytes" Progress in thyroidology 1989. 243-246 (1989)
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[Publications] Ken Kubota: "Purification and identification of thyrocyte-derived growth factor(TDGF)secreted by cultured human thyrocytes" American Thyroid Association. T22 (1989)
