1989 Fiscal Year Annual Research Report
基質小胞のホスファタ-ゼ系酵素群の分子特性と生理的役割
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63480412
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| Research Institution | Dental School Okayama University |
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Principal Investigator |
谷口 茂彦 岡山大学, 歯学部, 教授 (50034161)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
西 美恵子 岡山大学, 歯学部, 教務員 (40180575)
高橋 浩二郎 岡山大学, 歯学部, 助手 (00144775)
川本 奉之 岡山大学, 歯学部, 非常勤講師
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| Keywords | 基質小胞 / アルカリホスファタ-ゼ / 酸性ホスファタ-ゼ / 骨芽細胞 / MC3T3-EI |
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| Research Abstract |
本年度の研究においては、前年度にひきつづき関与する骨化過程を異にする下記の2種の基質小胞につき、その石灰化への実質的関与を必須条件として重視しつつ以下の研究を推進した。
1.軟骨内骨化過程の基質小胞系:仔ウシ骨端軟骨より再度のPercoll密度勾配遠心法で分画精製された基質小胞は、アルカリホスファタ-ゼ(ALP、p-nitrophenylリン酸を基質、pH9.8で測定)の最大比活性を示し、そのリン酸基転移酵素作用により小胞内外での石灰化にあずかると推定された。しかし共存する酸性ホスファタ-ゼ(ACP、pH5.5)は再分画後もALPとの活性比が一定でなく、前年度に示唆された小胞の不均一性はartifactでなく、むしろ石灰化に関与しない小胞の混在の可能性が考えられ、また固有のACPの局在の可能性は保留された。
2.膜内骨化過程にあずかる骨芽細胞様株MC3T3-EIよりの基質小胞:この培養細胞系で光顕レベルでの観測と組織化学的判定を併行した結果、基質小胞が放出される時期は、レチノイン酸レセプタ-遺伝子が転写されALPレベルが急上昇する単層増殖の終結直後、つまり多層化増殖とCa^<2+>沈着により石灰化が始発する時点と判断され、石灰化に直接関与する基質小胞を可及的にサンプリングしうる条件が膜内骨化系の場合にはかく特定された。細胞内ACPは初期の対数増殖期に達する最高レベルからは下降するが、この時点でも定常レベルを保っている。
3.ホスファタ-ゼ活性の迅速自動測定システムの開発:同システムとして全自動型微量ストップトフロ-装置が完成された。微量の基質小胞につき酵素の動力学的デ-タの集積や、高速液体クロマトグラフィの溶出画分の酵素活性の自動連続測定も本システムの接続により可能となり、極微量でその酵素活性のデ-タが速やかに得られるようになったため,2.の方向への研究の強力な推進が可能となった。
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[Publications] Takahashi,K.,Kuroishi,T.,Yasuda,K.,Sano,T.and Taniguchi,S.: "Microstopped-flow/continuous-flow apparatus for serial measurement of enzume reactions and its application as a real-time analyzer for column chromatography." Analytica Chimica Acta. 220. 13-21 (1989)
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[Publications] 高橋浩二郎,谷口茂彦: "液体クロマトグラフィ-のリアルタイムアナライザ-" HITACHI SCIENTIFIC INSTRUMENT NEWS. 32. 10-12 (1989)
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[Publications] Noji,S.,Yamaai,T.,Koyama,E.,Nohno,T.and Taniguchi,S.: "Special and temporal expression pattern of retinoic acid receptor genes during mouse bone development." FEBS Letters. 257(1). 93-96 (1989)
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[Publications] Nakayama,T.,Takahashi,K.,Noji,S.,Muto,K.,Nishijima,K.and Taniguchi,S.: "Functional modes of retinoic acid in mouse osteoblastic clone MC3T3-EI,proved as a target cell for retinoic acid." FEBS Letters. 261(1). 93-96 (1990)
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[Publications] Takahashi,K.,Yanagida,A.,Shimidzu,M.,Shindo,H.and Taniguchi,S.: "Intracellular levels of epidermal growth factor reaceptor and acid/alkaline phosphatases in proliferating mouse osteoblastic MC3T3 and human epidermoid carcinoma A431 cells."
