精製したTn3トランスポゼ-スによるin vitro DNA再編成反応系

1989 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 63480512
• Research Institution: Kansai Medical University
• Principal Investigator: 杉野 義信 関西医科大学, 教養部, 教授 (00028177)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 森田 正之 関西医科大学, 教養部, 講師 (20148555)
• Keywords: トランスポゾン / Tn3 / トランスポゼ-ス / DNA欠失 / IHF / モノクロ-ナル抗体

Research Abstract

(1).平成元年度までに精製したトランスポゼ-スによるDNA欠失形成のin vitro系が確立した(Proc Japan Acad.,65,Ser.B,1-4,1989)。これはTn3トランスポゼ-スの他、IHF蛋白を含む反応系である。但し、反応のレベルがまだ低く、またin vivo反応にみられる欠失端点の塩基配列についての特異性もみられない。そこでその原因解明の一助として反応産物の塩基配列決定を多数の分子について行なった(発表準備中)。
(2).他方in vivo反応との対応を重視すべく、in vivoにおいて、HUとIHF蛋白の関与の有無を突然変異体を用いて検索した、その結果、意外にもHU、IHFのどちらもin vivoで不要と判明した(Gene,76,359-362,1989;J,Kansai Med,Univ.,印刷中)。
(3).Tn3トランスポゼ-スに対する多種のモノクロ-ナル抗体を用いて、トランスポゼ-スとDNAとの特異的及び非特異的結合の阻害、更に又ス-パ-ヘリカルDNAに対する優先的結合の解析を行なった。(投稿準備中)。
(4).なおTn3トランスポゼ-スの関与するらしいin vitro及びin vivoの反応で、今迄に知られていない全く新しいタイプの興味あるDNA更編成が起こることが判明した(投稿準備中)。

Research Products

• [Publications] Morita,M.&Sugino,Y.: "An in vitro system involving Tn3 transposase that catalyzes the formation of DNA deletions" Proc,Japan Acad.65(B). 1-4 (1989)
• [Publications] Morita,M.,Kano,M.,Imamoto,F.&Sugino,Y.: "The HU protein is not essential for generating deletions adjacent to transposou Tn3" Gene. 76. 359-362 (1989)
• [Publications] Morita,M.&Sugino,Y.: "Effects of polA mutations on Tn3 transposition into the host chrosome and on DNA deletions adjacent to Tn3 terminus" 関西医科大学教養部記要. 12. 3-8 (1989)
• [Publications] Inaoka,M.,Morita,M.,Kano,M.,Imamoto,F.,&Sugino,Y.: "Neither HU nor IHF protein is essentlal for generating deletions adjacent to Tn3 terminus" Journal of Kansai Medical University,(英文sup.). 40. (1989)
• [Publications] Morita,M.&Sugino,Y.: "Insertion of IS4 into the tnpA geve of Tn3,Sequencing of the insertion site" Gene.
• [Publications] Takeda,K.&Sugino,Y.: "Monocloncl antilodies distinguish between specific and non-specific DNA binding of Tn3 transpooase"