マンソン裂頭条虫擬充尾虫の産生する成長ホルモン様物質についての研究

1990 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 63570175
• Research Institution: Ehime University
• Principal Investigator: 平井 和光 愛媛大学, 医学部, 助教授 (20093940)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 坪井 敬文 愛媛大学, 医学部, 助手 (00188616)
• Keywords: 成長ホルモン様物質 / マンソン裂頭条虫 / 擬充尾虫 / 成長因子 / 肝細胞増殖因子 / 成長ホルモン受容体

Research Abstract

マンソン裂頭条虫擬充尾虫が産生する成長ホルモン(GH)様物質の生理学的特性とその構造を追求するために充分量の精製標品を得る必要があり、精製法の改良を試みそして生理活性を観察した。従来は虫体抽出液の塩析、疎水及び陰イオン交換クロマトグラフィ,ゲル濾過の4段階で精製したが、改良の結果では虫体抽出液をGH受容体結合アフィニティクロマトグラフィ,ゲル濾過の2段階で精製され、特異的GH活性は195倍に上昇し、収率も良好であった。この精製されたGH様物質の分子サイズは、以前に精製した27KDとは異なり、16KDであった。この新たに見出された16KD蛋白は肝細胞増殖活性を持ち、さらに抗ヒトGHモノクロナ-ル抗体と交叉反応する物質であった。さらにこのGH様物質はゴ-ルデンハムスタ-の血糖上昇を抑制することが示唆された。一方、アフィニティクロマトグラフィにてGH受容体に弱い結合をする物質が認められ、これを陰イオン交換クロマトグラフィ、ゲル濾過にて精製すると、以前に精製した27KD糖蛋白であった。この27KD糖蛋白も16KD蛋白と同様に肝細胞増殖活性を示し、抗ヒトGHモノクロナ-ル抗体と交又反応した。そして27KD糖蛋白をリジンエンドペプチダ-ゼにて切断し、エドマン分解法によりApplied Biosystem Protein Sequenatorを用いてアミノ酸配列を決定した。27KD糖蛋白断片の15個のアミノ酸配列はカテプシンLと67%の相同性を持っていたが、GHとの相同性は認められなかった。これらの結果から、GH受容体に強く結合し、抗ヒトGHモノクロナ-ル抗体と交叉反応する16KD蛋白が肝細胞増殖活性を持つことから本虫感染による肝細胞増殖を惹起させる本体であると考えられ、この物質のcDNAのクロ-ニング、塩基配列の解明が今後の課題として浮上した。

Research Products

• [Publications] Hirai,K.et al.: "Effect of infection with Spirometra erinacei plerocercoids on thyroid hormone in mice." Parasitology Reseach. 74. 267-270 (1988)
• [Publications] Hirai,K.et al.: "Hepatocyte proliferating activity of a growth hormoneーlike factor from plerocercoids of the tapeworm,Spirometra erinacei." Abstracts of 5th International Congress of Invertebrate Reproduction.148 (1989)
• [Publications] 平井 和光: "マンソン裂頭条虫擬充尾虫由来の成長促進因子ーSparganum Growth Factorの生理作用." 医学のあゆみ. 146. 836 (1988)
• [Publications] 平井 和光他: "マンソン裂頭条虫擬充尾虫由来の成長ホルモン様物質の精製とその特性" 寄生虫学雑誌. 38. 87 (1989)
• [Publications] 坪井 敬文他: "マンソン裂頭条虫擬充尾虫によるマウス肝細胞増殖促進作用" 寄生虫学雑誌. 38. 87 (1989)
• [Publications] 平井 和光他: "マンソン裂頭条虫擬充尾虫が産生する成長ホルモン様物質の特性" 寄生虫学雑誌. 39. 84 (1990)
• [Publications] 坪井 敬文他: "マンソン裂頭条虫擬充尾虫由来の肝細胞増殖因子" 寄生虫学雑誌. 39. 84 (1990)
• [Publications] 平井 和光他: "マンソン裂頭条虫擬充尾虫が産生する肝細胞増殖因子" 愛媛医学. 9. 525-532 (1990)
• [Publications] Phares,C.K.et al.: "Evolutionary imprications of a human growth hormoneーlike factor in the tapeworm genus Spirometra." Advances in invertebrate reprodution 5.5. 169-174 (1990)
• [Publications] Tsuboi,T.et al.: "Decrease of liver glycogen content in golden hamsters infected with plerocercoids of Spirometra erinacei." Parasitology Research. (1990)