1989 Fiscal Year Annual Research Report
プリン代謝異常症で臨床症状が発現する生化学的機序-特にグアニンヌクレオタイドとの関連
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63570286
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Research Institution | Tokyo University of Foreign Studies |
Principal Investigator |
西田 ゆう太郎 東京外国語大学, 保健管理センター, 教授 (20114598)
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Keywords | HGPRT欠損症 / 遺伝子 / ヌクレオタイドの変異 |
Research Abstract |
Hypoxanthineguaninephosphoribosyltransferase(HGPRT)はプリン体の再利用に働く酵素である。HGPRTの活性が低下(部分欠損症)すると、プリン体は尿酸に分解され、幼少時より高尿酸血症を来たし、腎障害、痛風を発症する。HGPRTが完全に欠損すると自傷行為、choreoathefose,等の精神神経症状を伴ったLesch-Nyhan症候群となる。今回、5例のHGPRT欠損症でリンパ球を用いてcell line株を樹立した。酵素の基質、hypoxanthine,PRPP(phosphoribosylpyrophosphate)へのKmを測定するとPRPPに対しては正常者と差がなかったが、Hypoxanthineに対してはコントロ-ルの7〜10倍の高値を示した。5例よりDNAをGross-Bellard3の方法により分離し、制限酵素BamH_1、HindIII、EcoRl、BglII、PstI、PvIIで切断して^<32>Plabelled HGPRT C-DNA probeを用いてSouthern blot analysisを行なった。しかしコントロ-ルと全が差がなく、遺伝子のdelotion等は検出できなかった。4例よりRNAをSimpson3の方法でOligo-dTクロマトグラフィ-を用いて分離し、^<32>P-CTPをラベルしたHGPRT・C-DNAを用いてNorthern blotを行なったことろ、1例のみでmRNAが短いことが判明したが、他の例ではコントロ-ルと差がなかった。3例のHGPRT欠損症のDNAでpolymerase chain reactionによりdeoxyribonucleotide primerを用いてこれらのHGPRTのC-DNAを増幅させ、このDNAのseguenceを行なった。Lesch-Nyhorm症候群の1例では54番目がATGよりCTGに変化(メチオニンガロイシン)、1例では179番目がGTTよりGGTに変化、また180番がGGAよりAGAに変化(このためバリンガグリシン、またグリシンガアルギニンに変っていた。他の1例では747より797まで51のnucleotideが欠落していた。このためこの例では短いm-RNAが産生されており、アミノ酸は2つ欠けていた。以上HGPRT欠損症3例の遺伝子の変異を解明した。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] Y.Nishida,Y.Hoshihara,T.Miyamoto: "Activity and effect of purine metabolizing enzymes in the digestine fract." Advances Exp Med Biol. 253A. 247-250 (1989)
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[Publications] Y.Nishida,F.Takeuchi,T.Miyamoto: "Simple sereening methods for disordess of purine metabolism using dried blood and purine spots on filter paper" Advances Exp Med Biol. 253A. 123-128 (1989)
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[Publications] F.Takeuchi,N.Kamatani,Y.Nishida,Y.Miyamoto: "Erythrocyte adenine PRPP avoilability in trs types of APRT deficiency using silicon oil method" Advances Exp Med Biol. 253A. 35-42 (1989)
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[Publications] T.Igarashi,M.Minami,Y.Nishida: "Molecular analysis of hypoxanthine-guanine phosphoribosyltr ansferase mutations in five unrelated Japanese patients." Acta Paediatrica Japonica. 31. 303-313 (1989)
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[Publications] 西田ゆう太郎: "高尿酸血症・痛風-その病態と食事指導" 第一出版株式会社, 64 (19898)