新生児壊死性腸炎:エンテロトキシン,活性酸素の関わり

1989 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 63570463
• Research Institution: National Research Institute for Child Health and Development
• Principal Investigator: 倉辻 忠俊 国立小児病院, 小児医療研究センター・共同利用室, 室長 (60051728)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小島 正 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (70129378) ; 綱脇 祥子 国立小児病院, 小児医療研究センター・共同利用室, 研究員 (00211384)
• Keywords: 新生児 / 未熟児 / 壊死性腸炎 / 好中球 / 活性酸素 / 過酸化脂質 / エンテロトキシン / クロストリジウム

Research Abstract

新生児壊死性腸炎を起こした生後7日の患者より分離されたクロストリジウム・ディフィシ-ルを培養し、その上清を、CHO細胞の細胞障害性を指標に文画し、エンテロトキシン(LT)とした。これは易熱性である。腸管上皮細胞ATCCーCCL6(小腸)、ATCCーCRL1541(結腸)はFlow Labo・より購入した。好中球は健康成人ボランティアから得た。CDlla(LFAー1),CDllb(CR3),CDllc(p150/95),CD18(βーsubunit of CDll),CD54(ICAMー1)に対する単クロ-ン抗体およびFITC結合抗マウスIgGーF(ab,)2は、コ-ルタ-、サンビオ、コスモ、ダコパットの各社より購入した。好中球運動能は膜フィルタ-法、O_2はcytochrome c還元法、過酸化脂質はチオバルビツ-ル酸法、細胞傷害性を[^<14>C]ーアミノ酸混合の取り込み法、細胞膜蛋白はフロ-サイトメトリ-法で測定した。
LTは好中球の細胞間接着蛋白(CD11/18)の発現を増強した。またLTは好中球運動機能、O_2生成能を亢進させた。顆粒球コロニ-刺激因子(GーCSF)はLTのCD11/18発現、機能亢進に相乗的に作用した。LTは好中球刺激と同濃度では、CCL6、CRL1541に細胞傷害作用があった。その百分の一の濃度で、腸管上皮細胞の細胞接着因子(ICAMー1)のを発現を増強した。
LTで処理した好中球をCCL6またはCRL1541に作用させると、細胞間接着が増加した。低濃度のFMLPをこれに作用させると、過酸化脂質の蓄積が著明で、またアミノ酸取り込みが低下した。これは通常の環境でよりも高濃度酸素環境下で著しかった。
以上から患者から分離したクロストリジウムのエンテロトキシンは壊死性腸炎の病因の一つと考えられた。

Research Products

• [Publications] 倉辻忠俊: "新生児壊死性腸炎の病因的予防法" NICU. 2. 596-599 (1989)
• [Publications] Kuratuji,T.,Ojima,T.,et al: "Generation of oxygen radicals and lipid peroxides by cells in sputa or peripheral blood from patients with bronchial asthma" Med.Biomed.Clin.Asp.Free Radicals. 2. 1257-1260 (1989)
• [Publications] Tsunawaki,S.,Sporn,M,et al: "Comparison of transfoming growth factorーβ and a macrophageーdeactivating polyーpeptide from tumor cells:differences in antigenicity and mechanism of action" J.lmmunol.142. 3462-3468 (1989)
• [Publications] Suematu,M.,Kuratsuji,T.,et al: "Realーtime visualization of luminolーdependent chemiluminescence from single neutrophil" Med.Biomed.Clin.Asp.Free Radicals. 2. 891-894 (1989)
• [Publications] Shinimiya,N.,Kuratsuji,T.et al: "The role of T cells in immunoglobulin class switching of specific antibody production system in vitro in humans." Cell Immunol.118. 239-249 (1989)
• [Publications] Kuratuji,T.,Tsunawaki,S.,Ojima,T.,et al: "Expression of intercellular adhesion moleculeー1(ICAMー1)on vascular endothelial cells and alveolar cells following treatment with recombinant human granulocyte colonyーstimulating factor" N.Engl.J.Med.
• [Publications] 倉辻忠俊、綱脇洋子: "白血球殺菌能日本生化学会編「新生化学実験講座」第12巻分子免疫学I," 東京化学同人(東京), 416 (1989)