1990 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子工学的手法による抗TSH受容体抗体の多様性に関する研究
Project/Area Number |
63570546
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Research Institution | Keio University |
Principal Investigator |
市川 陽一 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (30051402)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
赤真 秀人 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (10202524)
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Keywords | TSH / TSH受容体 / cDNA / EFー2 / バセドウ病 / モノクロ-ナル抗体 |
Research Abstract |
ヒトの甲状腺癌cDNAライブラリ-を組込んだ入gt11バクテリオファ-ジを大腸菌(Y1090)に感染させ、抗TSH受容体モノクロ-ナル抗体、バセドウ病患者血清を用いて、反応するクロ-ンを採取した。これらは1020ないし1900bpで、いずれもEco RT siteを有していた。1つのクロ-ンを32Pでラベルし、サザンプロット法によって検討したところ、相互にハイブリダイズすることが明らかになった。すなわち、これらのcDNAは同じメッセ-ジに由来すると考えられた。 クロ-ニングされたcDNAを有する入gt11ファ-ジを大腸菌Y1089に感染させ、ライソゲンを作成し、これを利用して融合蛋白を産生した。分子量は126〜132KDであった。これら蛋白の正常人、橋本病、バセドウ病および特発性粘液水腫患者血清との反応をウエスタンブロット法で検討した。その結界、バセドウ病および特発性粘液水腫患者血清では正常人および橋本病患者血清で認められなかった融合蛋白と一致するバンドを認められた。これらのcDNAをM13ファ-ジに挿入後、dideoxy法を用いて塩基配列を解析した。この塩基配列と現在までに一次構造が明らかになっている蛋白との相同性を検索したところ、ハムスタ-のelongation factor 2(EFー2)との間に高い相同性があった。 一方、正常人甲状腺組織のmRNAより、random primer法により作成し、入gt11に挿入したcDNAライブラリ-より、抗TSH受容体モノクロ-ナル抗体を用いて反応するクロ-ンを採取した。クロ-ンの1つは2000塩基対のreading frameを有し、その後報告されたヒトTSH受容体cDNAと一致していた。 始めに得られたcDNAによるアミノ酸をヒトTSH受容体のそれと比較すると4アミノ酸の配列が一致している部分が2カ所見いだされ、これらの部分がエピト-プである可能体が考えられた。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Ichikawa Y.: "Antiーthgrotropic hormore receptor antibody and thgroid direase" Japanese J Medicine. 27. 217-219 (1988)
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[Publications] Yoshida T: "Monoclonal antibodies to the thyrotropin receptor find to a 56ーKDa subunit of the thyrotrpin receptor and show heteogenous bioactivities" J Biol Chem. 263. 16341-16347 (1988)
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[Publications] 市川 陽一: "抗レセプタ-抗体と疾患" 病態生理. 8. 39-47 (1989)
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[Publications] 松下 庸次: "自己受疫性甲状腺疾患における自己抗原の分析" 慶應医学. 67. 967-977 (1990)
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[Publications] 市川 陽一: "作用物値別レセプタ-論、TSH" 日本臨床 増刊レセプタ-. 47. 197-200 (1989)
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[Publications] 吉田 正: "cDNAクロ-ニングによるTSHレセプタ-の構造解析" ホルモンと臨床 秋季増刊 甲状腺学の進歩. 8. 39-47 (1989)