1988 Fiscal Year Annual Research Report
ニューロン及びグリアに局在する機能蛋白質の遺伝子発現調節蛋白の分離と超微量分析
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63638505
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
高橋 康夫 新潟大学, 脳研究所, 教授 (00018590)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
崎村 建司 新潟大学, 脳研究所, 助手 (40162325)
桑野 良三 新潟大学, 脳研究所, 助手 (20111734)
栗原 正 新潟大学, 脳研究所, 助教授 (50018800)
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| Keywords | ニューロン / グリア細胞 / 遺伝子 / 転写 / 調節因子蛋白 / 微量分析 / プロモーター |
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| Research Abstract |
神経回路網の形成に関与する蛋白のうち神経伝達物質として機能すると考えられるコレシストキニン(CCK)及びニューロンの突起伸長作用を有するS-100βの2つの機能蛋白の遺伝子をクローニングし、その構造を解明した。これらの遺伝子のプロモータ領域と結合してその遺伝子発現を制御すると考えられる微量蛋白についてこれを分離しその構造を解明しようと試みた。今年度はその中のCCKの遺伝子発現調節蛋白について述べる。
(1)ゲルシフト分析法及びDNase footprinting法によって脳の細胞核抽出蛋白と結合すると考えられるDNA領域を明らかにすることができた。そこでゲルシフト分析法で見出した4コのバンドのうち脳特異的と認められた第4のバンドに相応する蛋白を精製しようと試みた。
(2)精製の手段として以下の方法を使用した。先づ脳の細胞核の抽出液を硫安で分画し、10〜60%硫安画分を集めてヘパリン-アガロースクロマトグラフィーを行い、食塩による段階的溶出を行い、ゲルシフト分析で各溶出画分を検討して、第4バンドの蛋白を含む画分を26mp_2の合成したOligodeoxynucleotideをカップリングしたDNA affimtyカラムで精製を行った。また別にヘパリン-アガロースクロマトグラフィー後の画分をゲルシフトで分析しその第4バンドより直接蛋白を溶出した。
(3)両者の方法で得た蛋白をSDS-PAGEで分析した処、何れの方法でも殆んど単一と思われるバンドを得ることが出来た。この蛋白について今後より詳細な検討を行う予定である。
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[Publications] Toru,Yamakuni: J.Neurochem.50. 282-284 (1988)
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[Publications] Tadashi,Kurihara: Biochem.Biophys.Res.Commun.152. 837-842 (1988)
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[Publications] Toru,Ichimura: Proc.Natl.Acad.Sci. 85. 7084-7088 (1988)
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[Publications] Yuka,Ohshima: FEBS Letters. 242. 425-430 (1989)
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[Publications] 高橋康夫: 神経精神薬理. 10. 409-433 (1988)
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[Publications] 高橋康夫: 蛋白質、核酸、酵素. 33. 1681-1687 (1988)
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[Publications] Yasuo,Takahashi: "Proceeding of 6th international symposium on Calcium-binding proteins in health and disease" PLENUM PRESS,
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[Publications] Yasuo,Takahashi: "Proceeding of international Symposium on neurons and Paraneurons" Japan Society of Histological Documentation,
