1989 Fiscal Year Annual Research Report
抗炎症剤S-ラクトイルグルタチオンの大量生産法の開発とその薬粧領域への応用
| Project/Area Number |
63860015
|
|---|
| Research Institution | KYOTO UNIVERSITY |
|---|
Principal Investigator |
木村 光 京都大学, 食糧科学研究所, 教授 (80026541)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田口 淳一 京都府立医科大学, 薬理学, 助手 (50188132)
村田 幸作 京都大学, 食糧科学研究所, 助教授 (90142299)
|
|---|
| Keywords | S-ラクトイルグルタチオン / HPLC / 抗炎症作用 / グルタチオンチオ-ルエステル / グリオキサラ-ゼI / メチルグリオキサ-ル / グルタチオン |
|---|
| Research Abstract |
S-ラクトイルグルタチオン(S-LG)はメチルグリオキサ-ルとグルタチオンとから、酵素グルオキサラ-ゼ工の作用により合成されるグルタチオンチオ-ルエステルの一種である。昨年度は本化合物の大量調製法を確立する目的で、培養工学的、及び遺伝子工学的手法を用いて、30g/l のS-ラクトイルグルタチオンの生産に成功した。本年度はS-LGの分離、精製条件とその薬理効果について検討を加えた。
1.S-LGの分離、精製条件の確立:反応液中に残存する未反応のグルタチオンとS-LGを分離するため、高速液体クロマトグラフィ-(HPLC)の利用を検討した。即ち、酵素反応液を1%TCAで除タンパクした後、Dowex1×8(ギ酸型)クロマトグラフィ-によりS-LGを分画し、更に分取用逆相HPLC(ウオ-タ-ズ社製μBondsphare 5μC-18 100Å,19x150mmカラム)により精製した。単一ピ-クとして溶出されたS-LG画分はシリカゲル薄層クロマトグラフィ-(Merck社製,Kiesel-qel 60F254)により、単一のニンヒドリン陽性のスポット(Rf値 0.55)を示し、またその融点は128〜130℃で、元素分析等の結果も標準S-LGと同じ値を示した。
2.S-LGの薬理作用:ラット腹腔内から採取した肥満細胞に対するS-LGのヒスタミン遊離抑制作用を調べた結果、S-LGはコンカナバリンA,或いはcompound48/80によるヒスタミン遊離を効果的に抑制した。また、カラギ-ナンにより誘発したラット後肢足蹠浮腫に対して、S-LGは200mg/kg(ラット体重)の濃度で、抑制的に働き、強力な抗炎症作用を有していることを明らかにした。
|
-
[Publications] Hae-ik Rhee: "Nucleotide sequence of the qlyoxalase I qene of Pseudo-monas putida" Agric. Biol. Chem.52. 2243-2246 (1988)
-
[Publications] Yoshiharu Inoue: "Metabolism of 2-oxoaldehydes in mold:purification and characterization of two methylqlyoxal reductases from" Eur.J.Biochem.171. 213-218 (1988)
-
[Publications] Kousaku Murata: "2-Oxoaldehyde metabolism in microorqanisms" Can.J.Microbiol.35. 423-431 (1989)
-
[Publications] Nobuhiko Kosugi: "Cloning of glyoxalaseI gene from bacterial sources and production of S-lactoylglutathione" BIO INDUSTRY. 6. 657-666 (1989)
-
[Publications] Masaki Iizuka: "purification and some properties of glutathione S-transferase from Escherichia coli B" J.Bacteriol.171. 6039-6042 (1989)
