Estroger作用をもつ抗体の作製とその応用に関する研究

1989 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 63870003
• Research Institution: JIKEI UNIVERSITY SCHOOL OF MEDICINE, DEPARTMENT OF MEDICINE
• Principal Investigator: 石川 博 東京慈恵会医科大学, 医学部, 教授 (30089784)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 権 五徹 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (40170477) ; 白澤 信行 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (40133392)
• Keywords: エストロジェン / エストロジェン抗体 / イディオタイプ抗体 / モノクロ-ナル抗体 / エストロジェン受容体 / エストロジン合成 / ハイブリド-マ細胞

Research Abstract

昭和63年度の研究成果と反省点をもとに、平成元年度の計画に沿ってエストロジェンに対するモノクロ-ナルおよびポリクロ-ナル抗体を作製した。モノクロ-ナル抗体は巻貝のヘモシアニンと共有結合させたものを抗原とし、ポリクロ-ナル抗体はグルタ-ルアルデヒドでポリマ-にしたものを抗原としてマウスに免疫した。各マウスの脾臓細胞とミエロ-マ細胞とのハイブリド-マの中からエストロジェン活性を示すものをクロ-ニングした。活性の測定はエストロジェン抗体に対してのトリチュウム標識エストロジェン結合をどれだけ阻害するかで行った。モノクロ-ナルおよびポリクロ-ナル抗体を免疫したものは、いずれも活性程度の差は有るものの約1割のクロ-ン細胞がエストロジェン様活性を示す物質を産出した。この物質についてDEAE-セファデックス、CM-セファデックス、プロテインA・セファロ-ス、抗マウス免疫グロブリン・セファロ-スなどのカラム・クロマトグラフィ-で精製を行ったところ、この物質は免疫グロブリンのような高分子蛋白質でないことが示された。そこで、ハイブリド-マ培養液から酢酸エチルとクロロホルムで抽出をしたところ、有機溶媒層に活性が認められたために、TLC(thin layer chromatography)による分析を試みた。抽出有機溶媒をシリカゲルのTLCで展開したところ、エストロジェン様活性は、平行して展開したエストロジェンそのものとほぼ同じ位置に認められた。さらに、HPLCで有機溶媒層を分画してエストロジェン様活性を調べ、その分画をMASスペクトルで解析したところエストロジェンそのものであることが明らかとなった。このことは、従来から言われている卵巣での内夾膜細胞と顆粒細胞を経るエストロジェン合成系とは全く異なったもので、1個の細胞が他の細胞の助けをかりずに培養下でエストロジェンを合成できることが明らかとなった。この事実はステロイドホルモン合成に新たな展開をもたらすものと期待される。また、イヂオタイプ抗体については更に研究を続けている。

Research Products

• [Publications] Shirasawa,N.: "Comparative immunohistochemical studies of prolactin(PRL)and growth hormone(GH)cells in mammals." Kyoto prolactin Conference.4. 20-32 (1989)
• [Publications] Nogami.H.: "Studies on prolactin and Growth Hormone Gene Expression in the Pituitary Gland of spontaneous Dwarf Rats." Endocrinology. 125. 964-970 (1989)
• [Publications] Fukuchi,Y.: "Growth hormone increases the antral gastrin cell density in spontaneous dwarf rats." Biomedical Research.10(6). 485-490 (1989)
• [Publications] Ishiwata,I.: "N-myc Amplification and Neuron-Specific Enolase Production of Ovarian Immature Teratoma" ACTA OBST GYNAEC JPN. 41. 1585-1586 (1989)
• [Publications] Ishiwata,I.: "Biological characteristics of adenocarcinoma cell line(HOUA-I)andB-lymphoblastoid cell line(HOUA-II)established from the same tissue of endometrial adenocarcinoma" Jikeikai Medical Journal. 36(4). 303-315 (1989)
• [Publications] Sakuma,S.: "Immunohistochemical studies on the somatostatin-and growth hormone-relating factor(GRF)-neurons in the hypothalamus of the novel dwarf rat;the spontaneous dwarf rat(dr)." Brain Research.493. 402-406 (1989)
• [Publications] Nogami,H.: "Electron-microscopic study on the anterior pituitary gland of spontaneous dwarf rats" Cell and Tissue Research. 258. 477-487 (1989)
• [Publications] J.H.Steel: "Galanin and Vasoactive intestinal polypeptide are colocalized with classical pituitary hormones and show plasticity of expression" Histochemistry. 93. 183-189 (1989)
• [Publications] Ono,I.: "神経芽腫細胞株HSNBの樹立と性状" HUMAN CELL. 2(4). 416-422 (1989)
• [Publications] Takeuchi.T.: "Molecular Mechanism of Growth Hormone(GH)Deficiency in the Spontaneous Dwarf Rat:Detection of Abnormal Splicing of GH mRNA by the polymerase Chain Reaction." Endocrinology. 126. 31-38 (1990)
• [Publications] Sakuma,S.: "The cell population of somatostatin and growth hormone releasing factor using guantitative immunohistochemistry in the isolated GH deficient dwarf rat" Brain Research. 506. 307-310 (1990)
• [Publications] Ishiwata,I.: "Carcina-embryonic proteins produced by Wilm's tumor cells in vitro and in vivo." Exp.Pathol.
• [Publications] Ishiwata,I.: "Characterization of Krukenberg tumor cell line especially biological relationship between cancer and stromal cell." Esp.Pathol.
• [Publications] Dhruba Raj Naik: "Localization pf Prolactin in the Pituitary Gland:a Comparative Immunohistochemical Study from Fish to Mammal." Kyoto Prolactin Conference.5.
• [Publications] 石川博: "介護福祉士実践シリ-ズ3巻老人介護の医学知識「介護福祉教材」編集委員会編" メジカルフレンド社, 328 (1989)
• [Publications] 石川博: "コアテキスト組織学(P311-P339,P358-P362,P392-P403)" 広川書店, 517 (1989)
• [Publications] 石川博: "臨床検査技師国家試験要点整理問題演習4解剖学" 金原出版, 301 (1989)