合成オリゴペプチド抗体を用いたCキナ-ゼ電顕免疫組織化学に関する試験的研究

1989 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 63870011
• Research Institution: Kobe University School of Medicine
• Principal Investigator: 田中 千賀子 神戸大学, 医学部, 教授 (20025571)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 斉藤 尚亮 神戸大学, 医学部, 助手 (60178499) ; 久野 高義 神戸大学, 医学部, 講師 (50144564) ; 谷山 紘太郎 神戸大学, 医学部, 助教授 (70030898) ; 西塚 泰美 神戸大学, 医学部, 教授 (10025546)
• Keywords: プロテインキナ-ゼC / サブタイプ / クロ-ニング / 中枢神経系 / 免疫組織化学 / 電子顕微鏡

Research Abstract

ホルモンや神経伝達物質による生体情報の伝達機構の中でプロテインキナ-ゼCは主な細胞内情報系としてその普遍的な重要性が確立され、広汎な医学領域において病態解析への新しい方向を与えるものとして注目されている。プロテインキナ-ゼCは生化学的、分子生物学的解析により多数の遺伝子に由来する分子複合体であることが明らかになった。これらのプロテインキナ-ゼC群はそれぞれその活性化様式基質特異性に特徴があり、またこれらのサブタイプは明らかに組織細胞内局在を異にする発現特異性を示すことから、細胞はそれぞれ固有のプロテインキナ-ゼCを有し独自の情報伝達に関与する可能性がある。本研究ではプロテインキナ-ゼCを介する細胞内情報伝達系に焦点をあて、次の試験的研究を行うことを目的とした。プロテインキナ-ゼCの極めて類似する7種のサブタイプについて得その全構造を決定し、それらのアミノ酸構造を手掛かりにオリゴペプチドを合成し、サブタイプ特異抗体を作製した。これらのサブタイプの脳内分布を免疫組織化学的手法を用いて検討すると各サブタイプは各々異なった分布を示した。このサブタイプの分布はいかなる神経伝達物質、あるいは受容体の分布とも完全には一致しなかった。さらに電顕免疫組織化学的方法で各サブタイプの細胞内局在を大脳皮質および海馬で検討した。γタイプは大脳皮質の錐体細胞および海馬の錐体細胞の細胞質、核、細胞膜、樹状突起に多く存在し、神経終末には極少量しか存在しなかった。βIタイプは大脳皮質の非錐体細胞のうち主にGABA作動性ニュ-ロンの細胞膜直下に分布し、βIIサブタイプは大脳皮質及び海馬CAI領域の錐体細胞のゴルジ体周辺と樹状突起に存在した。これらの結果はプロテインキナ-ゼCの各サブタイプが、特定のニュ-ロン内での独自の情報伝達機構に関与していることを示唆している。

Research Products

• [Publications] A.Ito: "Immunocytochemical localization of α-subspecies of protein kinase C in rat brain." Proc. Natl.Acad Sci. USA.inpress. (1990)
• [Publications] K.Hosoda: "Immunocytochemical localization of βI-subspecies of protein kinase C in rat brain." Proc. Natl.Acad Sci. USA.86. 1393-1397 (1989)
• [Publications] N.Saito: "Immunocytochemical localization of βII-subspecies of protein kinase C in rat brain." Proc. Natl.Acad Sci. USA.86. 3409-3431 (1989)
• [Publications] A.Ito: "Localization of βII-subspecies of protein kinase C in B cell of pancreatic islet." Diabetes. 38. 1005-1011 (1989)
• [Publications] T.Tsujino: "Light and electron microscopic localization of βI-,βII-and γ-subsepecies of protein kinase C in rat cerebral cortex." J.Neurosci.in press. (1990)
• [Publications] A.Kose: "Flectron microscopic localization of γ-and βII-subspecies of protein kinase C in rat hippocampus." Brain Res.in press. (1990)