2016 Fiscal Year Annual Research Report
CRISPRシステムを用いた一次シリア情報発信の実証と分子基盤解析
Publicly Offered Research
| Project Area | Cilium-centrosome system regulating biosignal flows |
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| Project/Area Number |
15H01207
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| Research Institution | Hamamatsu University School of Medicine |
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Principal Investigator |
池上 浩司 浜松医科大学, 医学部, 准教授 (20399687)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | シリア / ゲノム編集 / エクトソーム / 小胞放出 / 刺激 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
外来遺伝子の導入や強制発現によるアーティファクトを完全に排除するために前年度作成した内在性タンパク質への蛍光タンパク質ノックイン細胞を用い、以下の項目を実施した。
１）CO2インキュベーター一体型顕微鏡を用いた長時間タイムラプスイメージングは、一次シリアの三次元的配置の影響により好ましい結果が得られなかった。一次シリアを三次元的に撮影しながらタイムラプスイメージングが可能な恒温装置設置共焦点顕微鏡を用いて観察した結果、順行性IFTの一つIFT81が血清刺激により一次シリアの先端から放出される瞬間をとらえることに成功した。この結果を踏まえ、IFT81が一次シリア内でどのような挙動を示すかをさらに深く解析した。血清刺激を与えていない細胞では、内在性のIFT81が検出されない一次シリアが多数存在した。IFT81が一次シリアに局在している場合でも、一次シリアの基部に集中し先端にはほとんど局在していなかった。これに対し、血清刺激を与えると数時間で大部分の一次シリアでIFT81が検出されるようになり、特に一次シリアの先端に近い遠位部への蓄積が顕著であった。フローサイトメーターにより一次シリア由来の小胞を検出し分取する取り組みは、蛍光強度の不足あるいは小胞が小さすぎるなどの影響で好ましい結果が得られなかった。
２）浸透圧変化による一次シリアからの小胞放出の変化を検証した結果、高浸透圧刺激により小胞放出が減少することを見出した。炎症刺激の一つリポポリサッカライド刺激の影響を検証した結果、小胞放出は変化しなかった。一次シリアからの小胞放出を促進する刺激が発見されなかったため、小胞内容物の変化を解析する実験は行わなかった。
３）血清刺激による一次シリア先端切断と小胞放出について、前年度までの成果と本年度の成果の一部をまとめ英文学術雑誌に論文を公表した。
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| Research Progress Status |
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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Research Products
(10 results)
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[Journal Article] Dynamic Remodeling of Membrane Composition Drives Cell Cycle through Primary Cilia Excision2017
Author(s)
Phua SC, Chiba S, Suzuki M, Su E, Roberson EC, Pusapati GV, Setou M, Rohatgi R, Reiter JF, Ikegami K, Inoue T
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Journal Title
Cell
Volume: 168
Pages: 264-279
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
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