2016 Fiscal Year Annual Research Report
ターゲット遺伝子法によるグリアネットモデルサルの同定と繁殖の試み
Publicly Offered Research
Project Area | Glial assembly: a new regulatory machinery of brain function and disorders |
Project/Area Number |
16H01338
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Research Institution | Kyoto University |
Principal Investigator |
今井 啓雄 京都大学, 霊長類研究所, 准教授 (60314176)
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Project Period (FY) |
2016-06-30 – 2018-03-31
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Keywords | 霊長類 / アストロサイト / オリゴデンドロサイト / ミクログリア / MACS |
Outline of Annual Research Achievements |
霊長類におけるグリアアセンブリによる脳機能成熟機構に迫るため、MACS(Magnetic-activated cell sorting)による霊長類(ニホンザル、アカゲザル)グリア細胞の分離とRNAseqによる発現遺伝子の網羅的解析を試みた。まず、出生直後のニホンザルまたはアカゲザル合計3個体から新鮮な脳組織を単離し、プロテアーゼを付加したdissociation buffer中でホモジナイズすることにより、細胞を分離した。その後、anti-GLAST、anti-O4、そしてanti-CD11b抗体を結合したビーズにより、それぞれアストロサイト、オリゴデンドロサイト、そしてミクログリアを単離することを試みた。固定していない新鮮な脳組織を計画的に取得することが困難な場合が多いため、新鮮なうちに一旦凍結した組織から細胞を単離した結果、効率は低いながらもそれぞれの抗体に反応する細胞を捕集し、RNAを抽出することができた。現在、これらの細胞に発現する遺伝子について、RNAseqによる網羅的な解析を行っている。 また、これまでに同定した遺伝子変異ニホンザル(N2006等 、ニホンザルバイオリソース由来、BCR, LOC709740, CYTSA, ADORA2A, UPB1, C22orf13, SNRPD3, LOC708086, GGT1のduplication等)の細胞レベルでの表現系解析のため、ニホンザル線維芽細胞からの幹細胞作成とニューロン・グリアへの分化誘導を試みている。ヒトやチンパンジーの線維芽細胞に比べるとニホンザルの線維芽細胞は遺伝子導入効率が悪く、初期化が困難であったが、ウイルスベクターを用いることにより、iPS細胞は作成できた。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
MACSによる発現遺伝子の解析ができたため
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Strategy for Future Research Activity |
引き続き、発現遺伝子の解析やiPS細胞の作成を実施すると共に、ターゲットキャプチャによる変異個体のスクリーニングを行う。
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[Journal Article] Variation in ligand responses of the bitter taste receptors TAS2R1 and TAS2R4 among New World monkeys.2016
Author(s)
K. Tsutsui, M. Otoh, K. Sakurai, N. Suzuki-Hashido, T. Hayakawa, T. Misaka, Y. Ishimaru, F. Aureli, A. D. Melin, *S. Kawamura, *H. Imai.
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Journal Title
BMC Evolutionary Biology
Volume: 16
Pages: 208
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Presentation] Functional evolution of primate taste receptors.2016
Author(s)
Imai H., Suzuki-Hashido N., Nishi E., Hayakawa T., Hirai H., Purba L. H. P., Widayati K., Suryobroto B.
Organizer
The joint meeting of the 22nd International Congress of Zoology and the 87th Meeting of the Zoological Society of Japan
Place of Presentation
沖縄コンベンションセンター(宜野湾市)
Year and Date
2016-11-18 – 2016-11-18
Int'l Joint Research / Invited