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2009 Fiscal Year Annual Research Report

クローン胚に特異的なDNA脱メチル化と核リプログラミングの機構解明

Publicly Offered Research

Project AreaThe germline: its developmental cycle and epigenome network
Project/Area Number 21028001
Research InstitutionIwate University

Principal Investigator

澤井 健  Iwate University, 農学部, 助教 (90390864)

Keywordsウシ / 体細胞クローン / 初期胚 / エピジェネティクス / DNAメチル化 / ヒストンアセチル化 / トリコスタチンA / リアルタイムPCR
Research Abstract

マウスの体細胞核移植(NTSC)では,HDAC阻害剤のトリコスタチンA(TSA)で再構築胚を一定期間培養することにより胚盤胞(BC)期への発生率およびNTSC個体の作出率が向上することが知られているがウシNTSC胚の遺伝子発現機構におよぼす影響は明らかではない。そこで本年度は,TSA処理がウシNTSC胚のmRNA発現量およびヒストンのアセチル化におよぼす影響について検討した。ウシ線維芽細胞をドナー細胞に用いてNTSCを行い,50nMTSA添加または無添加培地で再構築胚を14時間培養した。培養7日目にBC期胚を採取し,RT-リアルタイムPCR法を用いてIGFBP-2,IGFBP-3およびFGF-4遺伝子のmRNA発現量解析を行った。また,BC期におけるヒストンH3およびH4のアセチル化状態を組織免疫染色法により解析した。ウシNTSC胚のIGFBP-2発現量はTSA処理の有無にかかわらず体内受精・体内発生(Vivo)胚および体外受精(IVF)胚と比較して差は認められなかった。TSA無処理NTSC胚のIGFBP-3発現量はVivo胚と比較して有意(P<0.01)に低い値を示したが,TSA処理胚においてはVivo胚およびIVF胚と比較して差は認められなかった。一方,NTSC胚のFGF-4発現量はTSA処理の有無にかかわらずVivo胚と比較して有意(P<0.01)に低い値を示した。TSA無処理NTSC胚のヒストンH3およびH4はともに低アセチル化状態にあったが,TSA処理により高アセチル化状態を示す胚が増加し,その割合はVivo胚と同程度であった。以上の結果より,ウシNTSC胚のTSA処理は,再構築胚のmRNA発現およびヒストン修飾を変化させ,NTSC胚の遺伝子発現機構の一部を正常化する可能性が示唆された。

  • Research Products

    (3 results)

All 2010 2009

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (2 results)

  • [Journal Article] Changes in the DNA methylation status of bovine embryos from the blastocyst to elongated stage derived from somatic cell nuclear transfer2010

    • Author(s)
      Sawai, K., Takahashi, M., Moriyasu, S., Hirayama, H., Minamihashi, A., Hashizume, T., Onoe, S.
    • Journal Title

      Cellular Reprogramming 12

      Pages: 15-22

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] トリコスタチンAがウシ体細胞核移植胚の遺伝子発現およびヒストン修飾におよぼす影響2009

    • Author(s)
      澤井健, 大崎翔, 藤井貴志, 橋爪力, 平山博樹, 森安悟
    • Organizer
      第102回日本繁殖生物学会
    • Place of Presentation
      近畿大学農学部(奈良県)
    • Year and Date
      2009-09-11
  • [Presentation] ウシ体細胞クローン胚の遺伝子発現とその制御機構2009

    • Author(s)
      澤井健
    • Organizer
      第147回日本獣医学会学術集会
    • Place of Presentation
      栃木県総合文化センター(栃木県)
    • Year and Date
      2009-04-02

URL: 

Published: 2011-06-16   Modified: 2016-04-21  

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