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2009 Fiscal Year Annual Research Report

アミノ酸配列の置換を生じるRNA編集の生理的意義の解明

Publicly Offered Research

Project AreaDiversity and asymmetry achieved by RNA program
Project/Area Number 21112515
Research InstitutionOsaka University

Principal Investigator

河原 行郎  Osaka University, 医学系研究科, 特任准教授(常勤) (80542563)

Keywords核酸 / RNA / 糖尿病 / 神経科学 / 細胞・組織 / 転写後修飾
Research Abstract

本研究は、アミノ酸配列置換型RNA編集の更なる重要性を解明するため、ホルモン分泌に必須のCAPS1に生じるRNA編集をモデルとして選択し、生理的意義を解明することを目的として研究をスタートさせた。
1) CAPS1 RNA編集に必要な相補鎖を決定するため、下流イントロン中の2箇所に候補領域を絞った。これらの候補領域のRNAと組み換え編集酵素を用いてRNA編集アッセイを行い、編集部位から約1.5kb下流の領域がRNA編集に必須であることを決定した。また野生型マウスと編集酵素ADAR2ノックアウトマウスの各臓器における編集効率を比較し、脳ではADAR1とADAR2が協調して編集を触媒し、膵臓ではADAR1が責任酵素であることを決定した。
2) CAPS1細胞内局在部位へRNA編集が与える効果を解析するため、GFPなどのタグを結合させたCAPS1発現ベクターを作製した。この際未編集型と編集型を用意し、PC12細胞とMIN6細胞へ導入した。非刺激下では、両者の局在に差異がないことを確認した。今後、ホルモン分泌刺激を加えた後にCAPS1の局在がRNA編集によってどのように変化するのかを観察する。
3) CAPS1によるカテコラミン分泌へRNA編集が与える効果を解析すうため、PC12細胞中の内在性CAPS1の発現を抑制する必要がある。このため、CAPS1に対するshRNAを導入し、これを安定発現する細胞株を樹立した。今後、この細胞株へ未編集型と編集型CAPS1を導入し、カテコラミン分泌へRNA編集が与える効果の解析を行う。
4) ホルモン分泌におけるRNA編集の重要性を明らかにするため、ADAR1をノックアウトしたMIN6細胞の樹立を行うこととした。このため、Flox-ADAR1 mutantマウスをIT6マウスと交配中であり、樹立後インスリン分泌能を解析する予定。

  • Research Products

    (5 results)

All 2010 2009 Other

All Journal Article (3 results) Book (1 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] RNA編集の異常と関連する疾患2010

    • Author(s)
      河原行郎
    • Journal Title

      実験医学 印刷中

  • [Journal Article] RNA編集によるmiRNAの機能調節2009

    • Author(s)
      河原行郎、西倉和子
    • Journal Title

      蛋白質核酸酵素 VOL.54

      Pages: 1133-1140

  • [Journal Article] RNA編集から疾患治療へ2009

    • Author(s)
      河原行郎、西倉和子
    • Journal Title

      遺伝子医学MOOK 最新RNAと疾患研究 15巻

      Pages: 174-180

  • [Book] Post-transcriptional gene regulation2010

    • Author(s)
      ルイスバレンチ、河原行郎
    • Publisher
      Wiley-VCH book社(印刷中)
  • [Remarks]

    • URL

      http://apprentice.jpn.org/hp/research-kawahara.html

URL: 

Published: 2011-06-16   Modified: 2016-04-21  

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