2009 Fiscal Year Annual Research Report
構造を基盤とした選択的スプライシング因子ASD-1、SUP-12の協働作用の解明
Publicly Offered Research
| Project Area | Diversity and asymmetry achieved by RNA program |
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| Project/Area Number |
21112522
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| Research Institution | The Institute of Physical and Chemical Research |
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Principal Investigator |
武藤 裕 The Institute of Physical and Chemical Research, RNA生物学研究チーム, チームリーダー (30192769)
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| Keywords | NMR / 構造解析 / SUP-12 / ASD-1 / 選択的スプライシング / RNA結合ドメイン / FGFレセプター / C. elegans |
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| Research Abstract |
黒柳、萩原らが開発したスプライシングパターンのモニター系により、線虫ではASD-1とSUP-12が協同してFGFRのpre-mRNAの特定の部位に結合しスプライシング反応を制御して、筋肉芽細胞特異的なFGFR分子を生成することが明らかにされた。本研究では、このふたつの因子による協同的なスプライシング反応の制御を構造生物学的な手法によって明らかすることを目指した。まず、ASD-1およびSUP-12について、それぞれ、RNA結合ドメインを含んださまざまなコンストラクトを構築し、大腸菌を用いたin vivo合成あるいは無細胞タンパク質合成系を用いて大量発現を構築した。この中で、構造解析に適した試料を得て、安定同位体標識体を作成してNMR法を用いた構造解析をSUP-12, SUP-12+RNA配列、SUP-12+ASD-1+RNA配列で解析を進めた。すでに、SUP12単体およびSUP-12とRNAとの複合体構造をNMR法を用いて決定することができた。これによると、SUP-12は、ASD-1のRNA結合ドメイン構造的に類似しており、そのβシート上で同じUG配列を認識しているが、認識の様式が異なることが明らかになった。また、このUGに先行するRNA部分の認識については、両者で、かなり差が見られ、SUP-12では、一残基が、flip-outして直接には、SUP-12のRNA結合ドメインによって認識されていないことが明らかになった。現在は、SUP-12, ASD-1, RNAの三者複合体の構造解析を進め、お互いの共同作用について今後明らかにしていく。
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