2021 Fiscal Year Annual Research Report
CFTR ユビキチン化制御剤の創出と CF 創薬への応用
Publicly Offered Research
| Project Area | New frontier for ubiquitin biology driven by chemo-technologies |
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| Project/Area Number |
21H00294
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| Research Institution | Kwansei Gakuin University |
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Principal Investigator |
沖米田 司 関西学院大学, 生命環境学部, 教授 (90398248)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | ユビキチンリガーゼ / RNF185 / RNF5 / RFFL / CFTR / DUB / リガンド |
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| Outline of Annual Research Achievements |
A1. CF-HBE における RFFL PPI 阻害剤の有効性評価: RFFL PPI 阻害剤 化合物A は CF-HBE においても，CF 治療剤 Orkambi 存在下で CFTR 機能を改善する傾向が観察された．他の CF 治療剤存在下でも，化合物A が治療効果を増強するか否かを評価する予定である．
A2. RNF5/RNF185特異的二重阻害剤の同定: ケミカルアレイスクリーニングにより同定した候補化合物について，SPR 解析，DSF thermal shift assayにより RNF5, RNF185 と結合する化合物を同定した．一部の化合物は，in vitro Ub assay により，E3 リガーゼ活性を高濃度で阻害する可能性が示唆された．
A3. RNF5，RNF185のX線結晶構造解析: RNF185 断片のX線結晶構造解析に成功した．
A4. RNF5-CFTR, RNF185-CFTR相互作用領域の同定: 精製タンパク質を用いた AlphaLISA により，RNF5, RNF185 の細胞質領域と，CFTR-NBD1 が直接的に相互作用することを見出した．今後，NanoBiT 法により，細胞内での結合様式を評価する．
B1. CFTR 関連 DUB リガンドの同定: USP19 断片を用いたケミカルアレイスクリーニングにより，USP19 に結合する化合物候補を得た．今後，SPR 等の二次スクリーニングにより, USP19 リガンド化合物を同定する．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
RFFL-DUB相互作用領域の同定は進展していないが，その他の実験計画は予定通りに進行している．
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| Strategy for Future Research Activity |
USP19 リガンド探索については， USP19 DUB 活性を指標とした化合物スクリーニングや， 人工進化の手法を用いた DNA アプタマーの探索を行い， さらなる効率化を狙う．
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