2011 Fiscal Year Annual Research Report
ALSサルモデル、患者サンプルを用いたTDP-43病態の検索
Publicly Offered Research
| Project Area | Generation of synapse-neurocircuit pathology |
|---|
| Project/Area Number |
23110505
|
|---|
| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
|---|
Principal Investigator |
横田 隆徳 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (90231688)
|
|---|
| Keywords | ALS / 皮膚 / TDP-43 / RT-PCR |
|---|
| Research Abstract |
本研究では、免疫病理組織学的および定量的RT-PCRを用いた分子生物学的手法により、孤発性ALS患者の生検皮膚におけるTDP-43mRNA発現量を検索し、孤発性ALSの分子病態におけるTDP-43発現上昇の病態との関連を明らかにし、運動神経選択性の分子基盤を検索することを目的とする。ALS患者および対照疾患患者のヒト生検皮膚で、3.8%チオシアン酸アンモニウムを用いて表皮と真皮を酵素学的に剥理し、表皮部分をホモジネートし、IsogenキットでRNAを抽出した。TDP-43の翻訳領域にprimer/probeを設計し、表皮の内部コントロール分子としてKeratin(KRT)5,10を用いた。これらによりTDP-43mRNAの定量を、Taqmanの定量的RT-PCRによって行い、これまでにALS患者10例および対象疾患患者4例の解析を終えた。TDP-43mRNAのCt値とKRT5およびKRT10mRNAのCt値の差は、TDP-43とKRTlOの場合は明らかな差がない(ALS群:8.43、疾患対照群:8.34)のに対し、TDP-43とKRT5ではALS群の方がわずかに大きくなっていた(ALS群:7.41、疾患対照群:6.29)。このことはALS群においてTDP-43mRNA発現量が低下していることを示しており、ALS患者の皮膚組織では何らかのフィードバック機構が存在している可能性がある。今後はさらに症例数を蓄積し、両群の間に統計学的な有意差があるかを検証していく予定である。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
ヒト皮膚検体からのRNA抽出方法の適正化に時間を要してしまった。サンプル採取時の凍結保存状態によってもデータが変化してしまうことが判明したため、現在前向きにサンプル収集を進めている。
|
| Strategy for Future Research Activity |
ヒト皮膚検体(ALS群および疾患対照群)を前向きに収集し、それぞれの免疫組織学的解析、RT-PCR解析を進め、両群で有意差が認められるかどうかを検証していく予定である。
|
-
[Journal Article] Non-human primate model of ALS with cytoplasmic mislocalization of wild-type TDP-432012
Author(s)
Uchida A, Sasaguri H, Kimura N, Ono F, Sakaue F, Hirai T, Tajiri M, Kanai K, Ohkubo T, Sano T, Shibuya K, Kobayashi M, Ueno T, Sunaga F, Ikeda S, Kubodera T, Tomori M, Sakaki K, Kusano K, Enomoto M, Yokota S, Hirai Y, Yasutomi Y, Kuwabara S, Uchihara T, Mizusawa H, Yokota T
-
Journal Title
Brain
Volume: 135
Pages: 833-846
DOI
Peer Reviewed
-
-
-
-
-
[Journal Article] In Vivo application of an RNAi strategy for the Selective Suppression of a Mutant Allele2011
Author(s)
Kubodera T, Yamada H, Anzai M, Ohira S, Yokota S, Hirai Y, Mochizuki H, Shimada T, Mitani T, Mizusawa H, Yokota T
-
Journal Title
Hum Gene Ther
Volume: 22
Pages: 27-34
DOI
Peer Reviewed
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
