2012 Fiscal Year Annual Research Report
ウイルスゲノムＲＮＡの品質管理： 翻訳・転写・粒子形成の密接な関わり
Publicly Offered Research
| Project Area | Diversity and asymmetry achieved by RNA program |
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| Project/Area Number |
23112719
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| Research Institution | University of Hyogo |
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Principal Investigator |
今高 寛晃 兵庫県立大学, 工学(系)研究科(研究院), 教授 (50201942)
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| Project Period (FY) |
2011-04-01 – 2013-03-31
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| Keywords | 再構成 / 翻訳 / ウイルス / 試験管内合成 / ウイルスカプシド / 翻訳因子 / タンパク質プロセッシング / タンパク質合成 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は懸案であった再構成型翻訳システムを完成させた。ＨｅＬａ細胞よりリボソーム、ｔＲＮＡ，ｅＥＦ２を精製した。ｅＥＦ１（ｅＥＦ１Ａ， ｅＥＦ１Ｂａｌｆａ， ｅＥＦ１Ｂｇａｍｍａ）複合体とｅＲＦ（ｅＲＦ１， ｅＲＦ３）複合体はそれぞれＢＨＫ２１細胞で発現し、ニッケルカラムで精製した。２０種類のアミノアシルｔＲＮＡ合成酵素もＢＨＫ２１細胞で発現させた。そのうちＧｌｕ－ＰｒｏＲＳ， ＬｙｓＲＳ， ＡｒｇＲＳ， ＧｌｎＲＳ， ＭｅｔＲＳ， ＬｅｕＲＳ， ＩＬｅＲＳ、ＡｓｐＲＳは複合体として精製した。以上の因子とＴ７ＲＮＡポリメラーゼ、ＡＴＰ，ＧＴＰ，ＣＴＰ，ＵＴＰ，アミノ酸などと混合し，システムを構築した。テンプレートはＣ型肝炎ウイルスのリボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）の下流に目的タンパク質をコードするようにした。レニラルシフェラーゼ（３８ｋＤａ），Ａｇｏ－２（８０ｋＤａ）そしてｂｅｔａ－Ｇａｌ （１２０ｋＤａ）をコードさせるとそれぞれ全長のタンパク質が合成された。
このシステムを用い、脳心筋炎ウイルスのカプシド分断のメカニズムを探った。カプシドタンパクである２Ａ－２Ｂの部分はウイルス由来のプロテアーゼによって切断されず、分断のメカニズムは不明であった。ヒト細胞抽出液由来タンパク質合成系で２Ａ２Ｂ部分を翻訳すると２Ａと２Ｂに分断された。そのメカニズムを探るために２Ａ２Ｂ部分を上の再構成型翻訳システムで反応させた。すると、抽出液由来タンパク質合成系と同様に２Ａと２Ｂに分断されて合成された。このことは２Ａ２Ｂの分断には特別な因子は必要でないということを示している。そして、ｅＲＦを抜いて翻訳すると、２Ａは合成されたが２Ｂは合成されなかった。２Ａ２Ｂ部位には翻訳終結コドンは無いが、終結因子が２Ａ２Ｂの分断に必要であることがわかった。
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| Research Progress Status |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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