2012 Fiscal Year Annual Research Report
ＯＧＦＯＤ１による翻訳開始因子キナーゼの水酸化
Publicly Offered Research
| Project Area | Regulation of signal transduction by post-translational modifications and its pathogenic dysregulation |
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| Project/Area Number |
23117504
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| Research Institution | Fukushima Medical University |
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Principal Investigator |
五十嵐 城太郎 福島県立医科大学, 医学部, 准教授 (80375162)
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| Project Period (FY) |
2011-04-01 – 2013-03-31
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| Keywords | 結晶構造解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
真核細胞は、鉄不足、低酸素によるストレスを受けたとき，タンパク質合成が低下することが知られている。本研究では，この現象に関与する翻訳開始因子キナーゼHRIを対象として，新規の鉄・酸素センサータンパク質OGFOD1による活性調節機構について、HRIの翻訳後修飾に焦点を当て、分子・細胞レベルでの解析を行う。
1）OGFOD1について，核移行配列を含むN末端部分28残基を短縮した短縮型OGFOD1組換えタンパク質を用いて，結晶構造解析に向けたスクリーニングを行った。その結果，ヒット条件が見つかり，微結晶が得られた。回折データを収集したものの，低分解能のため構造解析は難しく，分解能向上のため結晶化条件の最適化を行っている。
2）OGFOD1の細胞内での動態・局在を調べるために，蛍光タンパク質を融合したOGFOD1を作製し，蛍光顕微鏡を用いた観察を行った。全長型OGFOD1においては，核への局在が観察された。一方，短縮型OGFOD1においては，核局在のみならず細胞質への分布も認められなかった。
3）培養細胞中におけるHRIのユビキチン化修飾を検出するために，プロテアソーム阻害剤bortezomibを用いて解析を行った。bortezomibによりHRIの分解は抑制されるものの，ユビキチン化は観察されていない。
今後，試験管内において，OGFOD1の酵素活性，OGFOD1とHRIとの相互作用について解析を行う予定である。
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| Research Progress Status |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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