2011 Fiscal Year Annual Research Report
ＣＯＰ９シグナロソームを介した脱Ｎｅｄｄ８化によるシグナル伝達と発がんの理解
Publicly Offered Research
| Project Area | Regulation of signal transduction by post-translational modifications and its pathogenic dysregulation |
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| Project/Area Number |
23117521
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| Research Institution | Nara Institute of Science and Technology |
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Principal Investigator |
加藤 順也 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 教授 (00273839)
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| Keywords | COP9 シグナロソーム |
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| Research Abstract |
（１）CSN5/Jab1の条件的ノックアウトの最適化とシグナル伝達制御の解析
CSN5/Jab1 Floxマウスからマウス胎児由来線維芽細胞（MEF）を単離し、これにタモキシフェンにより誘導可能なCRE組換え酵素を導入した。さらに、タモキシフェン誘導性CRE組換え酵素の導入量、タモキシフェンによる処置濃度、処置時間など、様々な誘導条件を検定し、最適条件を見つけ出した。この細胞を用いて、CSN5遺伝子をノックアウトした後に増殖因子を作用させ、CSN5の存在・非存在化で種々のシグナル伝達経路が活性化されるかを検討した。特に、MAPキナーゼ経路とPI3キナーゼ経路に注意し、Rasシグナル経路を検定した。
（２）活性化型Rasによる細胞がん化に対するCSN5/Jab1ノックアウトの影響
活性化型変異Ras遺伝子を導入したMEFに対して、（１）で最適化したCSN5/Jab1ノックアウトの条件を適応した。得られた細胞に関して、増殖能の検定（コロニー形成能の測定、増殖曲線の作成）や、トランスフォーメーション能の測定（フォーカス形成能の測定）を行った。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
研究の性質上マウスを用いた実験を多く行っており、その中で誘導性条件性ノックアウトマウスを作製しているが、他研究機関にて作製したため、維持、交配とスクリーニングに予想以上の手間と時間がかかり、また、搬送時に当初の予定に無かったクリーニングのステップが加わったため、実験の日数が大幅に伸びてしまった。
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| Strategy for Future Research Activity |
マウスの交配を効率よく行い、目的の細胞を分取し、速やかに研究を進める。
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