2011 Fiscal Year Annual Research Report
タンパク質脱リン酸化酵素を介したアブシジン酸シグナルネットワークの解析
Publicly Offered Research
| Project Area | Integrated analysis of strategies for plant survival and growth in response to global environmental changes |
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| Project/Area Number |
23119521
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| Research Institution | National Institute of Agrobiological Sciences |
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Principal Investigator |
西村 宜之 独立行政法人農業生物資源研究所, 放射線育種場, 主任研究員 (70405041)
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| Keywords | 分子間相互作用 / 環境応答 / 植物ホルモン / アブシジン酸 / タンパク質脱リン酸化酵素 |
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| Research Abstract |
種子発芽時にアブシジン酸(ABA)シグナルの負の制御因子として主要な役割を担う2C型タンパク質脱リン酸化酵素(PP2C)のクラスターAに属するAHG1に注目し、AHG1の相互作用因子の同定を試みた。まず、シロイヌナズナの野生型Col-0にYFPを融合させたYFP-AHG1を発現させた過剰発現体を作成、ホモラインを選抜し、以下の解析に用いた。クラスターAに属する別のPP2Cの一つであるABI1の解析より、YFP-ABI1タンパク質は細胞質と核に局在することを報告していたが、YFP-AHG1タンパク質は核に強く局在していた。また、YFP-AHG1過剰発現体はYFP-ABI1過剰発現体が示す植物体の矮性化は見られなかった。一方、YFP-AHG1過剰発現体は、YFP-ABI1過剰発現体と同じようにABAによる種子発芽の抑制が見られず、RD29BなどのABA誘導性遺伝子の発現誘導においても非常に強いABA非感受性を示すことを明らかとした。タバコを用いた共免疫沈降実験より、AHG1はPYR1とABA依存的な相互作用が見られないことを見出した。以上より、AHG1はABI1と共通する部分はあるが、明らかに異なる制御を受け、標的となるタンパク質も異なる可能性が示唆された。YFP-AHG1過剰発現体より、YFP-AHG1融合タンパク質に相互作用する因子をGFPアフィニティーカラムで精製し、現在、共同研究先で質量分析計を用い、YFP-AHG1の候補相互作用因子の同定を試みている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度は東日本大震災の影響により実験が2ヶ月ほど行えない状況にも関わらず、1)YFP-AHG1過剰発現体のホモラインの選抜、2)GFP抗体の作製、3)GFPアフィニティーカラムを用い、YFP-AHG1の候補相互作用因子の精製を行い、本年度の目標を達成したため。
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| Strategy for Future Research Activity |
今年度はAHG1相互用因子を同定し、機能解析を行う。また、ABI1とAHG1の相互用因子の違いを比較し、基質の共通性や特異性を明らかとし、複雑なABAシグナルネットワークの実態解明に迫る。
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[Journal Article] Chemical genetics reveals negative regulation of abscisic acid signaling by a plant immune response pathway2011
Author(s)
Kim TH, Hauser F, Ha T, Xue S, Bohmer M, Nishimura N, Munemasa S, Hubbard K, Peine N, Lee BH, Lee S, Robert N, Parker JE, Schroeder JI
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Journal Title
Current Biology
Volume: 21
Pages: 990-997
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Proteomic analysis of ABA perception and early ABA signaling mechanisms2011
Author(s)
Nishimura N, Hitomi K, Arvai AS, Rambo RP, Wang A, Lee S, Caddell DF, Sarkeshik A, Nito K, Park SY, Hitomi C, Carvalho PC, Chory J, Yates, JR, Cutler SR, Getzoff ED, Schroeder JI
Organizer
3nd International Symposium on Frontiers in Agriculture Proteome Research
Place of Presentation
つくば国際会議場(茨城)(招待講演)
Year and Date
2011-11-08
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