2012 Fiscal Year Annual Research Report
炎症性サイトカインと受容体の構造生物学的認識機構の解明
Publicly Offered Research
| Project Area | Structural basis of cell-signalling complexes mediating signal perception, transduction and responses |
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| Project/Area Number |
23121523
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
池水 信二 熊本大学, 大学院生命科学研究部, 准教授 (60333522)
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| Project Period (FY) |
2011-04-01 – 2013-03-31
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| Keywords | 分子認識機構 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
インターロイキン(IL)-23は、Th17細胞の活性化を介して炎症性自己免疫疾患に関わる。IL-23の受容体は、IL-23RとIL-12Rβ1からなる。IL-23と受容体の結合を阻害すると、疾患の病状が緩和される。IL-23については、米国の２グループにより修飾糖を切除した試料、我々により糖修飾形状の蛋白質の構造が明らかにされた。本研究の目的は、IL-23と２つの受容体IL-23RおよびIL-12Rβ1との認識機構を構造生物学的に明らかにすることである。
IL-23RおよびIL-12Rβ1の構造解析を目指して、GSTを融合させたIL-12Rβ1の細胞外ドメインを大腸菌を用いて発現させ、精製を行った。酵素を用いてタグの切除を行ったが、効率良くGSTを切り離すことに成功出来ていない。現在、GSTを切除する条件を検討中である。IL-23Rについては、細胞外に３つのドメイン(D)があるが、どの領域を介してIL-23と結合するのか、明らかにされていない。D1, D2-D3, D1-D3の発現を、大腸菌・動物細胞を用いて試みた。D2-D3について大腸菌を用いて発現させることに成功した。D1を含む試料については、大腸菌と動物細胞の両方で発現させることが出来ていない。調製したD2-D3を用いて結合実験を行ったところ、リガンドとの結合が確認出来なかった。現在、D1およびD1-D3の発現系の構築を進めているところである。
IL-23/IL-12Rβ1複合体の調製・結晶化。精製したIL-12Rβ1とIL-23混ぜて複合体として精製を行った。その後、微量結晶化装置モスキートを用いて結晶化を行ったところ、微結晶を得た。現在、構造解析に適した質およびサイズの結晶を得るため、結晶化条件の精密化を進めているところである。
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| Research Progress Status |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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Research Products
(5 results)
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[Journal Article] Impact of antibodies against amyloidogenic transthyretin (ATTR) on phenotypes of patients with familial amyloidotic polyneuropathy (FAP) ATTR Valine30Methionine.2013
Author(s)
Obayashi, K., Tasaki, M., Jono, H., Ueda, M., Shinriki, S., Misumi, Y., Yamashita, T., Oshima, T., Nakamura, T., Ikemizu, S., Anan, I., Suhr, O., Ando, Y.
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Journal Title
Clin. Chim. Acta
Volume: 419
Pages: 127-131
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Preparation, crystallization and preliminary X-ray diffraction studies of the glycosylated form of human Interleukin-232012
Author(s)
Shirouzono, T., Chirifu, M., Nakamura, C., Yamagata, Y., Ikemizu, S.
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Journal Title
Acta Crysatllogr.
Volume: F68
Pages: 432-435
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Crystallization and preliminary X-ray analysis of human MTH1 with a homogeneous N-terminus.2012
Author(s)
Koga, Y., Inazato, M., Nakamura, T., Hashikawa, C., Chirifu, M., Michi, A., Yamashita, T., Toma, S., Kuniyasu, A., Ikemizu S., Nakabeppu, Y., Yamagata, Y.
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Journal Title
Acta Crysatllogr.
Volume: F68
Pages: 432-435
DOI
Peer Reviewed
