2023 Fiscal Year Annual Research Report
Construction of a biosynthetic system of alkyne-containing peptides for Click-chemistry
Publicly Offered Research
| Project Area | Systems biosynthetics based on accumulation, prediction, and creation of biological reactions |
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| Project/Area Number |
23H04542
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| Research Institution | Saitama University |
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Principal Investigator |
藤城 貴史 埼玉大学, 理工学研究科, 准教授 (20740450)
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| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | クリック反応 / 三重結合 / アミノ酸 / PLP / 酵素 / 生合成 / ATP-grasp protein / X線結晶構造解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
当該年度では、三重結合を持つジペプチド類の生合成酵素群Besマシナリーの５種の鍵酵素BesA、BesB、BesC、BesD、BesEの大腸菌組換え酵素発現系の構築を行った。BesC、BesDは既報通りの条件で、His-tagにより高純度に精製可能であることを確認した。また、BesA、BesEについても、それぞれHis-tagによる大量生産と活性の確認に成功した。一方で、BesBについては、発現を確認したものの、他の酵素に比べ量が少なく、さらなる発現、精製条件の改良が必要と考えられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
５種全ての酵素で発現を確認しており、これらを全て１つのプラスミド上にオペロンの形で連結して大腸菌に生合成系を再構築することが可能な状態である。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は、BesABCDEをオペロンの形で連結して大腸菌に生合成系を再構築し、大腸菌細胞内で３重結合を持つジペプチドが合成されるかどうかを、細胞膜透過性のクマリンやBodipy誘導体型の蛍光剤を用いたin vivoクリック反応を用いて確認する。また、Bes酵素群の活性部位への変異導入による基質特異性の改変を行い、天然の３重結合を持つジペプチド以外にも、様々な人工型の３重結合を持つジペプチドが合成できるか挑戦する。
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Research Products
(7 results)
