2012 Fiscal Year Annual Research Report
線虫と哺乳類に共通するアロ認証機構の解析
Publicly Offered Research
| Project Area | Elucidation of Common Mechanisms for Allogeneic Authentication in Animals and Plants |
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| Project/Area Number |
24112716
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| Research Institution | Setsunan University |
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Principal Investigator |
西村 仁 摂南大学, 理工学部, 教授 (80241347)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2014-03-31
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| Keywords | 受精 / 配偶子間融合 / 精子 / Igドメイン / 線虫 / マウス / 進化 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
マウスIZUMO1は精子特異的な免疫グロブリン(Ig)様タンパク質で，配偶子間融合に必須である．しかし，IZUMO1の機能を含めた配偶子間融合機構は依然として不明のままである．研究代表者は，線虫精子上でIg様タンパク質が真の融合因子(fusogen)と結合していると考え，オス特異的なIg様遺伝子F28D1.8を同定した．さらに，この遺伝子の欠失(KO)変異体を調べた結果，KO雌雄同体では配偶子間融合が観察されなかった．また，Ig様ドメイン領域をマウスIZUMO1と交換したF28D1.8のキメラ遺伝子が部分的にKO線虫をレスキューしたので，F28D1.8タンパク質(CeIZUMO)がマウスIZUMO1様の分子であることが示唆された．本研究の目的は，CeIZUMOと結合している分子を同定した後，その結合分子の変異体を解析することで，線虫精子上の配偶子間融合装置を同定することである．
CeIZUMOは膜貫通ドメイン以外に疎水性領域をもつので，CeIZUMO自身がfusogenである可能性も考えられた．そこで，疎水性領域を欠失したCeIZUMOをコードするtransgeneを使い，KO線虫のレスキュー実験を行った．その結果，KO変異体の受精能はほとんどレスキューされなかったので，この結果は，CeIZUMOがfusogenである可能性を示唆している．
現在，CeIZUMO抗体を作製中で，このタンパク質の局在や結合因子の同定に使用予定である．また，ペプチドタグや蛍光タンパク質タグを融合させたCeIZUMOのtransgeneもKO線虫で発現させ，各種解析に使用する．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
F28D1.8遺伝子は繰り返し配列が多く，クローニング用の大腸菌や線虫自身にとってtoxicになっている．そのため，transgeneおよびtransgenic線虫の作製に時間がかかっている．
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| Strategy for Future Research Activity |
コピー数が少ないベクターや，相同組換えによるクローン化ゲノムDNAに基づいたtransgene作製法を使うことで，当面の問題が解決しつつある．
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