2012 Fiscal Year Annual Research Report
ｐ５３の下流で働く非コードＲＮＡ、ｌｉｎｃＲＮＡーｐ２１遺伝子操作マウスの解析
Publicly Offered Research
| Project Area | Functional machinery for non-coding RNAs |
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| Project/Area Number |
24115712
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
荒木 喜美 熊本大学, 生命資源研究・支援センター, 准教授 (90211705)
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| Project Period (FY) |
2012-04-01 – 2014-03-31
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| Keywords | non-coding RNA / 遺伝子トラップ / 遺伝子操作マウス / 遺伝子機能 / 挿入変異 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
lincRNA-p21ヘテロ接合体マウス (lincRNA-p21+/geo)、及びp53KOバックグラウンドでのlincRNA-p21+/geoのマウスを作出し、X-gal染色によりlincRNA-p21の発現を解析した。その結果、lincRNA-p21+/geoでは、小脳、脳脈絡叢、膵臓、心房等で染色が確認されたが、p53KOバックグラウンドではそれらの染色は全て消失した。RT-PCRでの発現解析では、発現が完全に消失する訳ではなく、かなり抑制されているということが分かった。このことは、このncRNAが生体においてもp53の支配を受けていることを示唆している。lincRNA-p21 geo /geo(ホモ接合体)は、外見上目立つ表現型は示さず、生殖能力も正常である。p53 KOが、６ヶ月齢までにほとんどの個体で腫瘍が発生するのに対し、lincRNA-p21ホモ接合体では、１年間の観察期間中明らかな腫瘍発生はみられず、生存率も野生型と変わらないことを確認した。
また、p53 KO のembryo fibroblast (MEF)はsenescenceを示さないため継代の継続が可能である。そこで、lincRNA-p21ホモ接合体からMEFを調製、増殖率を野生型MEF、p53 KOのMEFと比較した。その結果、増殖率は野生型MEFとほとんど変わらないことが分かった。実際、これらのMEFにおいて、アポトーシスに関わる遺伝子群の発現解析を行ったが、p53 KOのMEFと比較すると、発現変化のみられる遺伝子は比較的共通していたものの、発現の変化量は小さいものであった。
incRNA-p21強制発現マウスを作製するため、cDNAをクローニングしたが、全長は得られなかったので、5’側はgenomic DNAよりPCRでクローニングしてつなぐ、という手段で発現ベクターを構築した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
lincRNA-p21の発現解析、p53 KOのバックグラウンドでの発現解析、MEFの表現型、MEFにおけるアポトーシス関連遺伝子の発現変化等、予定していた解析を行うことが出来た。
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| Strategy for Future Research Activity |
lincRNA-p21ホモ接合体、p53 KO、incRNA-p21ホモ接合体でp53ヘテロ接合体等、各種genotype 間で、発がん率や死亡率等、長期の飼育を必要とする表現型の比較解析を行う。通常の状態では目立った表現型を示さないことから、膵炎の惹起や高脂肪食等、刺激に対する反応を調べる。また、過剰発現マウスを作製し、その表現型を調べる。
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[Journal Article] Perivascular adipose tissue-secreted angiopoietin-like protein2 (Angptl2) accelerates neointimal hyperplasia after endovascular injury.2013
Author(s)
Tian, Z., Miyata, K., Tazume, H., Sakauguchi, H., Kadomatsu, T., Horio, E., Takahashi, O., Komohara, Y., Araki, K., Hirata, Y., Tabata, M., Takanashi, S., Takeya, M., Hao, H., Shimabukuro, M., Sata, M., Kawasuji, M. and Oike, Y.
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Journal Title
J. Mol. Cell. Cardiol.
Volume: 57
Pages: 1-12
DOI
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