2014 Fiscal Year Annual Research Report
生細胞でのイメージングを基盤とするシリアの形成とタンパク質輸送機構の解明
Publicly Offered Research
| Project Area | Cilium-centrosome system regulating biosignal flows |
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| Project/Area Number |
25113514
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
中山 和久 京都大学, 薬学研究科(研究院), 教授 (40192679)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | シリア / 小胞輸送 / ライブセル・イメージング / BBSome |
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| Outline of Annual Research Achievements |
外部シグナルのセンサーとして働く繊毛は、多様な生理現象に関与し、その異常はBardet-Biedl症候群（BBS）などの繊毛病の発症につながる。このような異常には、繊毛への選択的なタンパク質の輸送の異常がかかわる。BBSの原因遺伝子の産物により構成されるBBSome複合体は、繊毛へのタンパク質輸送にかかわる。本研究では、BBSomeの構築様式と機能の解明をめざして研究を行った。
１）新たに開発した抗GFP-Nanobodyを活用したタンパク質間相互作用解析法（visible immunoprecipitation assay; VIPアッセイと命名）によって、BBSomeの8つのサブユニット（BBS1, 2, 4, 5, 7, 8, 9, 18）すべての間の相互作用を調べ、BBSomeの構築様式の全体像を解明した。特に、これまではBBSomeのサブユニットかどうかも不明であったBBS18がBBSomeの必須成分であることを証明した。
２）低分子量GTPaseのArl6/BBS3が、BBS1とのみ相互作用することをVIPアッセイによって示した。
３）相互作用解析の結果をもとにして、さまざまな細胞内局在解析を行い、BBSomeはBBS4を起点にして、中心体近傍で構築されることを示した。
４）EGFP-BBS1を安定発現する細胞株を樹立し、基底小体近傍と繊毛内に局在することを示した。
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| Research Progress Status |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] GM130 is a parallel tetramer in a flexible rod-like structure with N-terminally open (Y-shaped) and closed (I-shaped) conformations.2015
Author(s)
Ishida, R., Yamamoto, A., Nakayama, K., Sohda, M., Misumi, Y., Yasunaga, T. & Nakamura, N.
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Journal Title
FEBS J.
Volume: 282
Pages: in press
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Histamine synthesis is required for granule maturation in murine mast cells.2014
Author(s)
Nakazawa, S., Sakanaka, M., Furuta, K., Natsuhara, M., Takano, H., Tsuchiya, S., Okuno, Y., Ohtsu, H., Nishibori, M., Thurmond, R.L., Hirasawa, N., Nakayama, K., Ichikawa, A., Sugimoto, Y. & Tanaka, S.
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Journal Title
Eur. J. Immunol.
Volume: 44
Pages: 204-214
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Phospholipid flippase activities and substrate specificities of human type IV P-type ATPases localized to the plasma membrane.2014
Author(s)
Takatsu, H., Tanaka, G., Segawa, K., Suzuki, J., Nagata, S., Nakayama, K. & Shin, H.-W.
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Journal Title
J. Biol. Chem.
Volume: 289
Pages: 33543-33556
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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