2013 Fiscal Year Annual Research Report
細胞膜でのシグナル伝達を探索する遺伝子コード型分子プローブ
Publicly Offered Research
Project Area | Mutli-dimensional fluorescence live imaging of cellular function and molecular activity |
Project/Area Number |
25113706
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
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Research Institution | The University of Tokyo |
Principal Investigator |
佐藤 守俊 東京大学, 総合文化研究科, 准教授 (00323501)
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Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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Keywords | 超解像 / 蛍光タンパク質 / プローブ / イメージング / 細胞膜 / 蛍光 / 回折限界 / 蛍光 |
Research Abstract |
平成25年度には,光活性化型蛍光タンパク質の包括的な分割を行い,conditional paFP-GRとなるN末端断片,およびC末端断片の開発を行った.特に,N,C断片に,ラパマイシン依存的に二量体を形成するタンパク質(FKBP,FRB)を連結し,当該プローブのN,C断片の近接・相補化をラパマイシンで誘起できるようにした.ラパマイシンを添加する前後で,変異体の蛍光強度をモニターすることにより,光活性化特性が低下した変異体やN,C断片に親和性が生じた変異体を避けることができた.このように開発したconditional paFP-GRに様々なタンパク質を連結して培養細胞に発現させ,蛍光顕微鏡で観察したところ,タンパク質間相互作用依存的に当該蛍光プローブが相補化する様子を確認できた.さらに,当該細胞に紫外線を照射によって,conditional paFP-GRが赤色に変色する様子も確認している.このように,高い輝度と低い親和性,高い光活性化特性を兼ね備えたconditional paFP-GRの開発研究と検証研究を遂行している.同様のアプローチで,紫外線照射により無蛍光から緑色や赤色蛍光を発する光活性化型蛍光タンパク質について,その分割・相補化に関する開発研究を行っている.これにより,複数のタンパク質間相互作用を同時にマルチカラーで超解像イメージングできるような新しいシステムを構築したいと考えている.
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
新しい超解像イメージングを実現するプローブの開発に成功しつつあり,開発研究は概ね順調に進展している.
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Strategy for Future Research Activity |
当初の計画に従って,蛍光プローブを完成させ,細胞膜で生起する分子過程の超解像イメージングに繋げる.
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