2013 Fiscal Year Annual Research Report
腫瘍細胞死誘導時における腫瘍貪食樹状細胞のＣＤ８+Ｔ細胞活性化機構の可視化解明
Publicly Offered Research
| Project Area | Mutli-dimensional fluorescence live imaging of cellular function and molecular activity |
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| Project/Area Number |
25113711
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
戸村 道夫 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (30314321)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 生体内イメージング / 免疫系 / 化学療法 / 抗原提示細胞 / T細胞 |
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| Research Abstract |
皮内腫瘍移植モデルを用い、細胞死した腫瘍の貪食、腫瘍抗原を保持する DC の所属リンパ 節への移行、そして、抗原特異的 CD8+T 細胞とTregの三者間の所属リンパ節における相互作用を、非治療、および抗がん剤投与時の所属リンパ節において real time 可視化 することで、腫瘍抗原提示細胞の抗原特異的 CD8 +T細胞活性化における、Treg 及び抗がん剤投与の影響を目で見える形で示し明らかにするために、本年度は、樹状細胞のサブセット特異的に色変換蛍光タンパク質 ”KikGR” を発現するマウスとして、樹状細胞特異的蛍光タンパク質発現マウスとして、CD8+LN常在性DCおよび真皮Langerin+CD103+DCのみが蛍光タンパクを発現するXCR1-KikGRマウスを導入した。腫瘍から所属リンパ節に移行するほぼ全ての樹状細胞を可視化するためにほぼ全ての樹状細胞でKikGRを発現するマウスを新たに樹立した。Langerhans細胞およびLangerin+CD103+DCのみでKikGRを発現するLangerin-KikGRマウスを作製した。腫瘍細胞の大量細胞死を誘導するためにtdKeima及びOVA発現する腫瘍細胞株(EL4及び3LL)にさらにDiphtheria Toxin-receptorを発現した腫瘍細胞を作製、および、これら蛍光タンパク質発現マウスおよび腫瘍細胞を用いた生体内観察系を確立した。準備した樹状細胞特異的KikGR発現マウスと腫瘍細胞株を用い、リンパ節内に存在する腫瘍抗原を有し腫瘍から移行してきた樹状細胞を、生体内顕微鏡で観察する条件を確立した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
樹状細胞特異的にKikGRを発現するマウスの導入及び作製は予定通り進めることが出来た。
tdKeima及びOVA発現する腫瘍細胞株にさらにDiphtheria Toxin-receptorを発現した腫瘍細胞の作製に予定よりも長い期間を要したが準備を完了した。
Scaleによる透明化処理後の観察条件の設定は完了しており、観察サンプルを現在調製しており予定通りである。
抗原特異的Tregを可視化するための、hCD2-Foxp3 / OT-II TCR transgenicマウスの交配作製がやや遅れている。
抗がん剤投与後に、T細胞と腫瘍抗原を有する腫瘍から所属リンパ節に移行した樹状細胞の相互作用を観察するタイミングの決定がやや遅れている。現在、抗がん剤の投与用量の決定、および投与後に腫瘍から所属リンパ節に移行する樹状細胞数、所属リンパ節において腫瘍抗原を有する樹状細胞数の経時変化の解析および観察をフローサイトメトリーおよび二光子レーザー顕微鏡を併行して行っており出来るだけ早く決定する。
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| Strategy for Future Research Activity |
腫瘍細胞死誘導時における腫瘍を貪食したDCのCD8+T細胞活性化機構の可視化を目指し、現在までに導入および樹立した、樹状細胞特異的蛍光タンパク質発現マウスおよび腫瘍細胞株、これらを用いて確立した観察系により研究を推進する。
腫瘍抗原を保持するDCの腫瘍から所属リンパ節への移行、抗原特異的CD8+T細胞、抗原特異的Tregとの相互作用の可視化およびリンパ節内局在の解析を行う。樹状細胞特異的にKikGRを発現するマウスに形成したtdKeima発現腫瘍塊を光照射し、腫瘍内に浸潤しているDCを赤色にマークする。一定時間後に 所属リンパ節を生体内二光子顕微鏡により観察する。このとき、青色で蛍光標識したOVA特異的CD8T細胞およびCD4+制御性T細胞を前もって担ガン宿主に移入しておくことにより、T細胞との相互作用を観察する。さらに観察後、組織透明化処理を行った後、観察・解析することでリンパ節内での細胞相互作用の局在を明らかにする。薬物非投与時、抗がん剤投与時およびDiphtheria Toxin投与により腫瘍細胞の大量死を誘導した場合について、上記を検討することにより、腫瘍抗原提示細胞の抗原特異的 CD8 +T細胞活性化における、Treg 及び抗がん剤投与の影響を目で見える形で示し明らかにする。
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[Journal Article] Qualitative rather than quantitative changes are hallmarks of fibroblasts in bleomycin-induced pulmonary fibrosis.2013
Author(s)
Tsukui T, Ueha S, Abe J, Hashimoto S, Shichino S, Shimaoka T, Shand FH, Arakawa Y, Oshima K, Hattori M, Inagaki Y, Tomura M, Matsushima K.
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Journal Title
Am J Pathol
Volume: 183
Pages: 758-773
DOI
Peer Reviewed
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