2014 Fiscal Year Annual Research Report
E3ユビキチンリガーゼの機能ドメイン形成によるT細胞活性化制御機構の解明
Publicly Offered Research
| Project Area | Mutli-dimensional fluorescence live imaging of cellular function and molecular activity |
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| Project/Area Number |
25113725
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| Research Institution | The Institute of Physical and Chemical Research |
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Principal Investigator |
横須賀 忠 独立行政法人理化学研究所, 統合生命医科学研究センター, 上級研究員 (10359599)
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| Project Period (FY) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| Keywords | 免疫学 / シグナル伝達 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
T細胞が抗原提示細胞から情報を受け取る際、T細胞受容体(TCR)とその下流のシグナル伝達分子から成る凝集塊「TCRマイクロクラスター」が重要である。T細胞の過度な活性化を制御し、自己免疫疾患やアレルギーを回避するよう、TCRマイクロクラスターの視点からの抑制性メカニズムの解明が必要である。本課題研究では、E3ユビキチンリガーゼc-ClbおよびCbl-bが構成する新規クラスターを可視化し、TCRの取り込み・分解とT細胞活性の抑制機構の解明を目的とした。
ユビキチンのイメージング解析として、c-CblおよびCbl-bのエフェクター分子ユビキチンを可視化するため、ユビキチンと蛍光タンパクのキメラ分子、リジン残基K48およびK63のユビキチン結合特異的新規バイオプローブを作成した。TCRマイクロクラスターに凝集するユビキチンはNF-kB経路の活性化を示すK63がT細胞補助刺激分子の刺激依存的に凝集を示し、同時にK63によるTCRシグナルの活性化とインターナリゼーションを示す結果でもあった。特異的モノクローナル抗体と特異的バイオプローブを用いた実験結果は同じであった。直鎖型ユビキチンのイメージング解析では、NF-κB経路の活性化に重要と考えられている第一メチオニン残基(M1)を、M1特異的に認識するプローブを用いて特異的ユビキチンの局在を可視化し、M1結合を示すユビキチンはむしろNF-kB活性中心にあり、TCRマイクロクラスーにはない、という局在の違いを示せた。c-CblおよびCbl-b遺伝子欠損マウス由来末梢T細胞を用いて、c-CblおよびCbl-bの局在と、TCRマイクロクラスターの挙動を可視化したところ、それぞれのCblファミリー分子の局在のドメイン依存性が異なること、Cbl-b遺伝子欠損細胞にて激しくTCRの取り込みが低下していること、TCR下流のシグナル伝達分子が停滞することを示した。K63ユビキチンのTCRマイクロクラスターへの凝集は、c-CblではなくCbl-bに大きく寄与していた。
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| Research Progress Status |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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Research Products
(9 results)
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[Journal Article] Protein kinase C-η controls CTLA-mediated regulatory T cell function2014
Author(s)
Kok-Fai Kong, Guo Fu, Yaoyang Zhang, Tadashi Yokosuka,Javier Casas,Ann J Canonigo-Balancio, Stephane Becart, Gisen Kim, John R Yates III, Mitchell Kronenberg, Takashi Saito, Nicholas R J Gascoigne, Amnon Altman
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Journal Title
Nature Immunology
Volume: 15
Pages: 465-472
DOI
Peer Reviewed
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